| Summary: | Potensialet til bruk av induserte pluripotente stamceller har fått mye oppmerksomhet siden deres første produksjon. Disse cellene har en fenotype som ligner embryonale stamceller og kan derfor gi opphav til celler i alle kroppens vev. En vellykket regenerering fra differensiert til en pluripotent celle forbeholder kunnskap om hvilke gener som er aktive i de udifferensierte cellene. Med kjennskap til disse er neste steg å indusere uttrykket av de respektive genene i målcellen. Når cellene har blitt regenerert, er målet å etablere en udødelig cellelinje. Dette avhenger av et optimalisert medium som fremmer cellevekst samtidig som det hemmer celle-differensiering. I denne oppgaven har RNAseq-data blitt brukt til å se på genuttrykk i embryoniske stamceller hos laks, og identifisere gener involvert i å vedlikeholde en pluripotent fenotype, samt gener assosiert med differensiering. Disse markørene ble testet ved hjelp av qPCR og Western blotting på forskjellige cellestadier under tidlig utvikling. Nanog ble identifisert som en god markør for pluripotent celle, mens Apoa1 og K2c8 var gode markører for differensiering. Roaa ble valgt som kontrollgen, og ble brukt for å normalisere qPCR-dataene. Western blot-analysen av Oct4- og Sox17-antistoffene ga ikke konkluderende resultater, og videre analyse er nødvendig for å validere disse genene som markører for henholdsvis pluripotent og differensiert phenotype. Forskjellige sammensetninger av medier for dyrking av embryonale stamceller ble også testet i denne studien, og det ble gjort forsøk på å utvikle disse forholdene. Av de fem forskjellige mediene som ble testet, overlevde celler bare i fire av dem. Profileringsnivået var imidlertid for lavt, og brønnene ble aldri konfluente. Ingen av mediene oppfylte sitt formål og ville trenge videre optimalisering. The potential use of induced pluripotent stem cells has garnered significant attention since their first production. These cells have a phenotype similar to embryonic stem cells and can therefore give rise to cells in all ...
|
|---|