| Summary: | La Pitiosis es una enfermedad de áreas tropicales y subtropicales del mundo producida por el Oomyceto Pythium insidiosum. En los caninos la enfermedad se presenta principalmente con lesiones cutáneas y subcutáneas, así como gastrointestinales. La identificación definitiva del microorganismo se realiza a través del cultivo, pero requiere experiencia y tiempo. El objetivo de este estudio fue desarrollar un inmunoensayo a partir de proteínas purificadas de P. insidiosum para el diagnóstico serológico en caninos. A partir de un cultivo de P. insidiosum se obtuvieron los antígenos de cultivo filtrado y antígenos solubles de hifas rotas para el análisis de Western blot de las proteínas de P. insidiosum que reaccionaron específicamente con los anticuerpos presentes en sueros de conejos hiperinmunes. Las proteínas se separaron en geles de SDS-PAGE. El revelado inmunoenzimático se realizó con el sistema de proteína A conjugada a peroxidasa de rábano y se usaron como sustrato enzimáticos cloronaftol y peróxido de hidrogeno. Los antígenos inmunodominantes identificados fueron de 175, 125, 75, 71, 52, 46 y 35 kDa., reconocidos por los sueros de conejos hiperinmunes, por lo tanto a partir de estos antígenos se puede desarrollar una prueba serodiagnóstica sensible y especifica que permitirá un manejo temprano y satisfactorio de la enfermedad. Palabras Clave: pitiosis, inmunoensayo, perro, diagnóstico. ABSTRACT Pythiosis is a disease of tropical and subtropical areas of the world caused by the oomycete: Pythium insidiosum. In dogs the disease occurs mainly with cutaneous and subcutaneous lesions, and gastrointestinal. Definitive identification of the organism is through in vitro culture, but it requires experience and time. The aim of this study was to develop an immunoassay from P. insidiosum purified proteins for serological diagnosis in dogs. From a P. insidiosus culture, were obtained culture filtrated antigens and soluble antigens of broken hyphae for Western blotting analysis of proteins from P. insidiosum which reacted specifically with antibodies present in sera from hyperimmune rabbits. Proteins were separated on SDS-PAGE gels. The immunoassay system revealed was performed with protein A conjugated to horseradish peroxidase and hydrogen peroxide as well as cloronaftol were used as enzyme substrates. Immunodominant antigens identified were 175, 125, 75, 71, 52, 46 y 35 kDa., recognized by hyperimmune rabbit sera, therefore from these antigens may be developed a sensitive and specific serodiagnostic test, that allow an early and satisfactory management of the disease. Key words: pythiosis, dog, Immunoassay, diagnostics.
|
|---|