| Summary: | Titulo Ingeniero en Biotecnología Molecular EI uso de enzimas adaptadas/activas a bajas temperaturas tiene un alto potencial en terminos de menores costos energeticos, aplicaciones terapeuticas y menor contaminacion microbiana en procesos industriales. Las bacterias de origen marino antartico mantienen su metabolismo a muy bajas temperaturas, por 10 que son particularmente deseadas para la identificacion de dichas enzimas. Las lipasas son enzimas lipoliticas de gran utili dad en la industria biotecnologica. Sus aplicaciones involucran a la produccion alimenticia, de detergentes, farmacos enantiomericamente puros, cosmeticos, sintesis de compuestos quimicos, de biopolimeros y agroquimicos, entre otras. Se aislaron bacterias de origen marino antartico, que producen enzimas lipoliticas extracelulares con alta actividad a bajas temperaturas. Se selecciono la mejor cepa y se realize un analisis del DNAr 16S, que identifico a la cepa como Psychrobacter sp. El DNA genomico de este microorganismo se utilize para realizar una busqueda de un gen de lipasa utilizando partidores disefiados a partir de los alineamientos multiples de secuencias aminoacidicas de lipasas con actividad a bajas temperaturas, que son las pertenecientes al grupo de lipasas sensibles a hormonas (HSL) de las especies procariontes. Esto permitio clonar y secuenciar el DNA que codifica parcialmente para una lipasa (240 pb, 80 aa). A partir del fragmento de gen de lipasa obtenido se determinaron las secuencias de los extremos 3 y 5 , mediante tecnicas de genome walking estandarizadas en el laboratorio. Se encontro un ORF de 1.293 pb, que codifica para un polipeptido de 431 aminoacidos y que presenta un 89% de identidad con una lipasa previamente descrita de Moraxella sp (lip2). Ademas, se identificaron dos regiones altamente conservadas: los peptidos HGGG y GDSAG que son motivos caracteristicos del grupo HSL. Tambien se obtuvieron las secuencias rio arriba y rio abajo de este gen. El gen de lipasa fue clonado en los vectores de expresion pET22b( +) Y ...
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