| Summary: | "En insectos y crustáceos el gen de Dscam (molécula de adhesión celular del síndrome de Down) ha sido ampliamente estudiado. La participación de Dscam en el sistema inmune se ha reportado en la mosca de la fruta, camarón, mosquitos, y cangrejos entre otros. El gen Dscam puede dar origen a numerosas isoformas mediante splicing alternativo, con capacidad de responder de manera patógeno-específica. En moluscos bivalvos existe poca información acerca de la expresión, localización, existencia de isoformas y participación en la respuesta frente a patógenos. En este trabajo se logró amplificar todos los dominios de Dscam de Crassostrea gigas, C. corteziensis y C. sikamea. La secuencia de Dscam de Crassostrea spp. mostró una organización estructural similar a la descrita en otros invertebrados. Se logró la identificación de dos regiones conservadas que permitieron el diseño de sondas y oligonucléotidos específicos para las técnicas de hibridación in situ y PCR cuantitativa (qPCR). Dscam se expresa en branquias y manto de C. gigas y C. corteziensis sanos. La localización de Dscam en C. gigas infectados con herpes virus tipo 1 (OsHV-1) y C. corteziensis con Perkinsus marinus no se limita a branquias y manto también se observó en intestino, glándula digestiva y gónada. Los resultados de qPCR en C. gigas y C. corteziensis sanos e infectados sugieren que la expresión de Dscam podría estar relacionada con el patógeno al que fueron expuestos. La expresión de Dscam en branquias infectadas incrementa considerablemente respecto al control en ambas especies. Por otra parte, en manto no se observa diferencia, particularmente en presencia de P. marinus se observó una inhibición de la expresión. Para evaluar la participación de Dscam durante la exposición a un patógeno, se midieron los niveles de expresión de Dscam en branquias y manto de C. gigas adultos expuestos a E. coli. Además se determinaron los niveles de expresión de otros genes de respuesta inmune como FREP, TLR2 e interleucina 17 (IL-17-3). En general, los niveles de expresión de Dscam en manto fueron mayores en comparación con branquias. Los patrones de expresión fueron tejido-específico, en manto, un incremento gradual en la expresión de Dscam se observó de las 0 a 12 h, mientras que en branquias, no se observó un patrón de expresión particular. Los picos de máxima expresión se observaron a las 12 h posteriores en ambos tejidos. Los niveles de expresión de TLR2 fueron altos durante todas las horas evaluadas." "The Dscam (Down syndrome cell adhesion molecule) gene has been widely studied in insects and crustaceans. Its role in immunity has been reported in the fruit fly, shrimp, mosquitoes, bees and crabs, among others. It is known that Dscam potentially gives rise to numerous isoforms by alternative splicing, which are able to respond in a pathogen-specific manner. In bivalve molluscs, information about Dscam expression, localization, isoforms and its role in the immune response is scarce. In this work, the Dscam domains from Crassostrea gigas, C. corteziensis and C. sikamea were amplified. Sequence analysis showed that the structural organization of Dscam from Crassostrea spp. was similar to other invertebrates. Two conserved regions were found and used to design specific primers and probes to perform in situ hybridization and quantitative PCR (qPCR). Dscam was expressed in gills and mantle from healthy individuals of C. gigas and C. corteziensis. Dscam localization in C. gigas infected with herpes virus type 1 (OsHV-1) and in C. corteziensis infected with Perkinsus marinus was not limited to gills and mantle, since it was also found in intestine, digestive gland and gonad. Quantitative PCR results in healthy and infected C. gigas and C. corteziensis suggest that Dscam expression could be related to pathogen exposure. Dscam expression in infected gills increased substantially in comparison with healthy individuals in both species. On the other hand, the mantle showed no differences in Dscam expression; even more, a decreased expression was observed in C. corteziensis infected with P. marinus. In a controlled bioassay using gills and mantle from adults of C. gigas challenged with Escerichia coli the expression of Dscam, together with other immune-related genes such as Toll-like receptor, FREP and IL-17-3 was measured by qPCR. In general, the expression levels of Dscam were higher in mantle than in gills. The expression profiles were tissue-specific, in mantle, a gradual increase of expression was observed from 0 to 12 h, while in gills, the expression profile did not show any pattern. A delayed response of Dscam in gills and mantle was observed, with highest expression levels at 12 h post-infection. TLR2 expression levels were higher through all the experiment in both tissues. FREP expression showed a gradual increase from 8 h to 24 h in gills, and the higher expression levels were found in mantle at 4, 24 and 48 h."
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