| Summary: | 螺旋藻（Spirulina platensis），隸屬於藍綠藻，含有豐富的多元不飽和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acid, PUFA），γ-次亞麻油酸（γ-Linolenic Acid, GLA），研究發現具有調節免疫系統和發炎反應等功能。因此富含GLA之油脂近年來被視為最具開發成醫療或健康食品的潛力。油脂在自然界中具有多種的形態，其中以三酸甘油脂（Tiracylglycerol, TG）的形態最易於人體所吸收。因此在本實驗利用改變培養螺旋藻的光源與培養基成分，研究是否對於螺旋藻中的油脂含量與GLA含量有所提升。結果發現，在不同光源照射下（日光燈與植物栽培燈）對於螺旋藻中油脂含量並無顯著的影響。在改變培養基中的碳源（NaHCO3）與氮源（NaNO3）的有或無，發現亦無顯著的影響GLA的含量。接著利用自螺旋藻所萃得脂肪酸，利用尿素進行濃縮，使GLA含量由33%提高到55%。將取得之高含量的GLA轉化成三酸甘油脂的形式，因此利用甘油與脂解酵素共同進行酯化作用，將之轉化為富含GLA之三酸甘油酯，而三酸甘油酯的轉化率在72小時內約為26%，其中約有26%是由GLA所構成。 Spirulina platensis, a blue-green alga, is a rich source of γ-linolenic acid (GLA, 18:3n-6) which has been demonstrated to exhibit many beneficial health effects. GLA from glycerides, especially triglycerides (TG), is absorbed more easily than that from free fatty acids (FFA) or ethyl esters. In the first part of this study, we investigated the effects of light sources and the carbon and nitrogen supply on the growth and GLA content in S. platensis. The algae were cultivated in Zarrouk medium either with or without carbon and nitrogen limitation. The initial GLA concentration in S. platensis was approximately 30% of the total fatty acids. The results showed that light sources (fluorescent bulb vs. plant growing light tube) had no effect on biomass production. In addition, no significant difference was found in GLA content among algae cultivated under carbon (NaHCO3) and/or nitrogen (NaNO3)-limited conditions. In the second part of the study, attempts were made to synthesize GLA-enriched triglycerides by Candida antarctica lipase (Novozym 435)-catalyzed esterification. The GLA concentrate was obtained by saponification of S. platensis lipid and urea fractionation. The content of GLA increased from 33% (after saponification) to 55% (after urea fractionation) of the total fatty acids. Synthesis of GLA-enriched triglycerides was evaluated in lipase Novozym 435-catalyzed esterification of GLA concentrate and glycerol in hexane. The TG yield reached 26% after 24, 48, and 72 h of reaction and the resulting TG contained 26% GLA. 中 文 摘 要 . i 英 文 摘 要 . ii 目 錄 . iv 符號對照表 . xii 第一章 緒論 . 1 1.1 螺旋藻 . 1 1.1.1 螺旋藻簡介 . 1 1.1.2 螺旋藻的營養價值與應用 . 2 1.2 油脂分類與結構 . 4 1.3 多元不飽和脂肪酸 . 6 1.3.1 多元不飽和脂肪酸簡介 . 6 1.3.2 多元不飽和脂肪酸的生理功能 . 8 1.3.3 γ- Linolenic Acid的來源 . 8 1.3.4 GLA的生理功能 . 8 1.4 研究目的 . 11 第二章 文獻回顧 . 12 2.1 螺旋藻養殖 . 12 2.2 環境因子對於螺旋藻生長的影響 . 14 2.2.1 光度 . 14 2.2.2 溫度 . 15 2.2.3 鹽度 . 17 2.2.4 pH值 . 18 2.3 油脂之合成 . 19 2.4 藍綠藻中的油脂形式 . 22 2.5 PUFA的濃縮 . 25 2.5.1 PUFA的濃縮方法 . 25 2.6 酵素催化作用的優點 . 29 2.6.1 富含GLA 之三酸甘油酯的合成 . 30 2.6.2 酵素在有機溶劑中的催化反應 . 31 第三章 藥品與儀器 . 33 3.1 藥品 . 33 3.1.1 螺旋藻培養基藥品 . 33 3.1.2 油脂萃取、皂化、甲基化藥品 . 33 3.1.3 尿素濃縮與合成三酸甘油酯藥品 . 34 3.2 儀器設備 . 34 第四章 提升螺旋藻中GLA含量研究 . 37 4.1 螺旋藻的來源與培養環境 . 37 4.2 光源的選擇 . 38 4.3 實驗方法 . 39 4.3.1 計算生物質量 . 39 4.3.2限制氮碳源培養液之配置 . 39 4.3.3 油脂萃取 . 41 4.3.4 甲酯化 . 41 4.3.5 氣相層析儀的分析條件 . 42 4.3.6 統計 . 42 4.4 結果與討論 . 44 4.4.1 環境之影響 . 44 4.4.2 不同光源照射下對於螺旋藻的生長之影響 . 49 4.4.3 不同光源照射下對於螺旋藻油脂生成之影響 . 49 4.4.4 不同培養基條件下對螺旋藻生長與油脂形成的影響 . 55 4.4.5 結論 . 62 第五章 富含GLA之三酸甘油酯的合成研究 . 63 5.1 實驗目的 . 63 5.2 利用尿素包埋錯合物方式濃縮PUFA . 63 5.3 利用酵素合成富含GLA的三酸甘油酯 . 64 5.4 實驗方法 . 66 5.4.1 油脂皂化 . 66 5.4.2 尿素包埋錯合物濃縮PUFA方法 . 66 5.4.3 TLC分離 . 67 5.4.4 富含PUFA之TG合成 . 69 5.5 結果與討論 . 70 5.5.1 螺旋藻中油脂的分布 . 70 5.5.2 脂肪酸的皂化 . 70 5.5.3 多元不飽和脂肪酸的濃縮 . 75 5.5.4 富含GLA之三酸甘油酯合成 . 78 5.5.5 結論 . 85 結 論 與 展 望 . 86 結 論 . 86 展 望 . 87 參 考 文 獻 . 88
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