| Summary: | W genomie Arabiodposis kodowanych jest wiele białek z rodziny cyklin oraz kinaz cyklino-zależnych zaangażowanych w regulację cyklu komórkowego. Cykliny D pełnią ważną funkcję w przejściu komórek z fazy G1 do fazy S w wyniku interakcji z innymi białkami uczestniczącymi w cyklu komórkowym Arabidopsis thaliana. W niniejszej pracy otwartą ramkę odczytu kodującą Cyklinę D4;2 wklonowano do dwóch wektorów plazmidowych – pET-15b oraz pGEX-4T-1 – i użyto do nadekspresji w 4 szczepach bakteryjnych Escherichia coli - Bl21 (DE3) pRIL, C43, Origami B oraz Arctic Express. Analiza Western blot wykazała nadprodukcję białka His-CYCD4;2 w szczepach Bl21 oraz Arctic Express oraz jej brak w przypadku szczepów C43 oraz Origami B. Białko fuzyjne GST-CYCD4;2 produkowane było we wszystkich testowanych szczepach. Analiza SDS-PAGE próbek otrzymanych w wyniku izolacji oraz oczyszczania przy użyciu chromatografii powinowactwa białka His-CYCD4;2, wyprodukowanego w komórkach E.coli szczepu Bl21 (DE3) pRIL nie pozwala stwierdzić czy białko to jest obecne w oczyszczonym preparacie. In Arabidopsis genome, many proteins from cyclin and cyclin-dependent kinases family involved in regulation of cell cycle are encoded. Cyclin D protein family plays key function in phase G1/S progression by interactions with other proteins of Arbidopsis thaliana cell cycle machinery. In this paper, open reading frame encoding CyclinD4;2 was cloned into two plasmid vectors – pET-15b and pGEX-4T-1 – and used to over-expression in 4 bacterial Escherichia coli (abbreviated as E. coli) strains – Bl21 (DE3) pRIL, C43, Origami B and Arctic Express strain. Western blot analysis shows overproduction of His-CYCD4;2 protein in Bl21 (DE3) pRIL (abbreviated as BL21) and Arctic Express strains, but not in C43 and Origami B. In contrast to His-CYCD4;2 , GST-CYCD4;2 fusion protein were produced in all tested E.coli strains. SDS-PAGE analysis of isolation and purification by affinity chromatography test of His-CYCD4;2 overexpressed in cells of E.coli Bl21 (DE3) ) pRIL strain, does ...
|
|---|