Primary screening of blood donors by nat testing for HCV-RNA: development of an "in-house" method and results Triagem primária de doadores de sangue por teste de ácidos nucléicos: desenvolvimento de um método não-comercial e resultados

• Published in: Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo
• Main Authors: Silvano Wendel, José Eduardo Levi, Deise Tihe Takaoka, Isabela Cristina Silva, Juliana Polachini de Castro, Mário A. Torezan-Filho, Jorge Ghaname, Romualdo Gioachini, Joselito Brandão, Edison Luis Durigon
• Format: Article in Journal/Newspaper
• Language: English
• Published: Universidade de São Paulo (USP) 2007
• Subjects: Nucleic Acid Testing; Blood Donors; RT-PCR; Transfusional Risk; Hepatitis C Virus; HCV; Arctic medicine. Tropical medicine; RC955-962; Infectious and parasitic diseases; RC109-216; Arctic; Falso
• Online Access: https://doi.org/10.1590/S0036-46652007000300008; https://doaj.org/article/52cf0abb40c84826acabb01cbc0e5c73

An "in-house" RT-PCR method was developed that allows the simultaneous detection of the RNA of the Hepatitis C Virus (HCV) and an artificial RNA employed as an external control. Samples were analyzed in pools of 6-12 donations, each donation included in two pools, one horizontal and one vertical, permitting the immediate identification of a reactive donation, obviating the need for pool dismembering. The whole process took 6-8 hours per day and results were issued in parallel to serology. The method was shown to detect all six HCV genotypes and a sensitivity of 500 IU/mL was achieved (95% hit rate). Until July 2005, 139,678 donations were tested and 315 (0.23%) were found reactive for HCV-RNA. Except for five false-positives, all 310 presented the corresponding antibody as well, so the yield of NAT-only donations was zero, presenting a specificity of 99.83%. Detection of a window period donation, in the population studied, will probably demand testing of a larger number of donations. International experience is showing a rate of 1:200,000 - 1:500,000 of isolated HCV-RNA reactive donations. Desenvolveu-se uma metodologia própria ("in-house") baseada em RT-PCR, que permite detectar simultaneamente o RNA do vírus HCV e de um RNA artificial empregado como controle externo. As amostras são analisadas em pools de 6-12 doações, cada doação sendo incluída em dois pools diferentes, um horizontal e um vertical, permitindo a identificação imediata de uma doação reativa, sem a necessidade de desmembrar-se um pool reativo. O processo todo consumiu de 6-8 horas diárias e os resultados foram emitidos em paralelo à sorologia. O método detectou os seis genótipos de HCV, com um limite de sensibilidade de 500 UI/mL (95% hit rate). Até julho de 2005 haviam sido testadas 139.678 doações com a detecção de 315 (0,23%) doações reativas para HCV-RNA. Exceto cinco falso-positivas, todas estas doações também apresentavam o respectivo anticorpo, portanto não se detectou nenhuma doação em janela imunológica. A especificidade foi de 99,83%. ...