| Summary: | Uno de los mayores problemas en las pisciculturas durante estas últimasdécadas ha sido el aumento en el número de enfermedades ocasionadas principalmente por patógenos intracelulares y que aún no cuenta con tratamientos efectivos que se traduzcan en un control adecuado. Debido a estohan surgido una serie de estrategias para controlar las enfermedades infecciosas en la acuicultura entre otras cambios en la nutrición, desarrollo de vacunas y el uso de inmunoestimulantes. A la fecha, las disponibilidad de inmunoadyuvantes para uso en vacunas es limitado y sus mecanismos deacción son poco conocidos, situación que requiere mayor estudio ya que una estrategia importante en el control de enfermedades infecciosas en peces es la mejora de las vacunas a través del uso de adyuvantes mejores y más adecuados. Por esta razón en este trabajo nos propusimos evaluar y caracterizar el efecto de compuestos aislados de especies del género Heliotropium con actividad inmunoestimulante y capacidad adyuvante que permitan modular, orientar y mejorar la inmunidad de salmones y truchas. En particular, evaluamos la capacidad de 10 compuestos, 2 derivado terpénico y 8 flavonoides de inducir la expresión de genes de citoquinas claves en el establecimiento de la inmunidad, de los cuales se seleccionaron 3; dos flavonoides (H y G) y un terpenoide (D). Los resultados mostraron que los compuestos H y D y, el control R (Ribomunyl) aumentaron los niveles de transcritos de las citoquinas pro-inflamatorias IL-8, IL-12 y TNFα en los riñones de peces Salmo salar inyectados con 100 μg de estos compuestos. El compuesto H aumentó también los niveles de transcritos de la IL1β y el compuesto G, sólo indujo la expresión de TNFα. Por lo tanto, estos resultados muestran que estos compuestos generan un ambiente pro-inflamatorio principalmente en el riñón de los peces tratados. Con respecto a las citoquinas anti-inflamatorias analizadas, los compuestos H y D aumentaron la expresión de TGF-β1 y el compuesto D incrementó la expresión de IL-10. En conclusión, ya que estas dos citoquinas tienen propiedades anti-inflamatorias, se puede prever que el compuesto H y especialmente D, estarían promoviendo una respuesta inflamatoria regulada en el riñón de los peces inyectados.En cuanto al IFN de tipo I en el riñón de los peces inyectados, se observó que los compuestos H y D aumentaron los niveles de transcritos de IFNα1 así comotambién de IFN de tipo II (IFNγ) por lo que los compuestos H y D pueden inducirun estado antiviral, siendo probablemente mejor el efecto del compuesto H yaque indujo mayores niveles de IFNγ.De manera similar, los compuestos H y D aumentaron los niveles de transcritosde las citoquinas pro-inflamatorias IL-1β, IL-8, IL-12 y TNFα y de la citoquinareguladora TGFβ1 en la línea celular SHK-1; el compuesto G aumentó la expresión de las citoquinas IL-1β, IL-12 y TNFα pero no modificó la expresión de las citoquinas anti-inflamatorias en las células SHK-1. Por otro lado, cuando se analizó la expresión de la citoquina antiviral IFNα, se observó que loscompuestos H y D aumentaron los niveles de transcrito de esta citoquina en los cultivos celulares SHK-1. En resumen, los compuestos H, G y D son capaces de modificar los niveles de transcritos de citoquinas de forma diferencial en los cultivos de células SHK-1. Ya que la línea celular SHK-1 corresponde a un cultivo derivado de riñón anterior de salmón del Atlántico enriquecido enmacrófagos, los resultados sugieren que esta población celular contribuye al tipo de respuesta observada in vivo.La capacidad del compuesto H de inducir in vivo e in vitro la expresión de IFNα, se correlaciona con la actividad antiviral detectada en los sobrenadantes de lascélulas SHK-1 tratadas. En particular esta actividad se detectó como resistenciade células ASK a la infección con virus ISA. Ya que los compuestos H y D agregados directamente sobre las células ASK no producen este efecto, se concluye que el compuesto H indujo en las células SHK-1 un compuesto con actividad antiviral que está presente en el sobrenadante de las célulasestimuladas, lo que probablemente corresponde a IFNα.Finalmente, al evaluar la capacidad adyuvante de estos compuestos en Trucha arcoíris utilizando como antígeno modelo ovalbúmina, se demostró que, el compuesto D mejoró la proliferación antígeno-específica de linfocitos demostrando el efecto adyuvante. Más aún, se demostró que las células CD4+proliferan en respuesta al estímulo y que los transcritos IL-4/13, IFNγ y CD4 aumentaron en las células respondedoras lo que sugiere una respuesta a la estimulación por el antígeno similar a la de los mamíferos. Los resultados son consistentes además con un incremento de IFNγ, de los factores de transcripción T-bet, STAT-1 y GATA3 en el riñón de los peces tratados. En conjunto, el compuesto D, además de ser un buen inmunoestimulante, puedeser un excelente adyuvante para potenciar la respuesta inmune antígenoespecíficade trucha y salmones.En conclusión, los compuestos H (Falvonoide) y D (terpenoide) provenientes de especies del género Helíotropium son capaces de modular la respuesta inmune de truchas y salmones debido a sus propiedades inmunoestimulantes.
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