大菱鲆（Scophthalmus maximus）迟缓爱德华氏菌病免疫防控研究

• Main Author: 王冲
• Other Authors: 孙黎
• Format: Other/Unknown Material
• Language: Chinese
• Published: 2013
• Subjects: 迟缓爱德华氏菌; 弧菌; 菌毛蛋白; 疫苗; Scophthalmus maximus
• Online Access: http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17797

迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)是海水养殖鱼类中的重要病原菌，其所导致的迟缓爱德华氏菌病（edwardsiellasis）每年给海水养殖业造成巨大的经济损失。针对迟缓爱德华氏菌病的频繁爆发，本论文尝试构建和筛选了两类疫苗分别为亚单位疫苗rFima以及无毒株二价活疫苗P1V3来对迟缓爱德华氏菌病进行有效的预防及治疗。 首先通过in-frame基因敲除技术构建了迟缓爱德华氏菌致病性菌株TX01的fimA缺失突变株TXfimA，与TX01相比，TXfimA在生物膜形成、侵染鱼类组织、吸附和侵入宿主外周血淋巴细胞等方面的能力均显著下降。以上实验结果表明，fimA是迟缓爱德华氏菌的一个重要毒力因子。为检测FimA的免疫原性，我们体外表达并纯化了重组FimA（rFimA），将rFimA作为亚单位疫苗免疫大菱鲆，攻毒实验发现免疫后的大菱鲆能抵御迟缓爱德华氏菌的侵染（相对免疫保护率为70.2%），这表明rFimA是一个具有较高免疫保护效率的亚单位疫苗。此外我们发现rFimA对弧菌几乎没有免疫保护效应（相对免疫保护率为3.3%），但它却能显著提高哈氏弧菌亚单位疫苗rVhhP2的免疫保护效应，这一现象表明rFimA同时具有佐剂的效应。综上所述，FimA是迟缓爱德华氏菌的一个重要毒力因子，rFimA具有佐剂的效应同时具有作为亚单位疫苗应用的潜力。 为解决亚单位疫苗应用的局限性，本论文筛选了针对迟缓爱德华氏菌和弧菌的具有交叉保护效应的的浸泡疫苗和口服疫苗。首先从青岛附近海域中筛选到2种无毒株P1SW和V3SW，经16sRNA测序分析，P1SW和V3SW分别属于假单胞菌属和弧菌属，通过口服加浸泡的方式制备成单价和二价疫苗对鱼体进行免疫，攻毒后发现单价疫苗P1SW免疫后的大菱鲆对迟缓爱德华氏菌有显著的抵抗能力（相对免疫保护率为42.4%），单价疫苗V3SW免疫后的大菱鲆对于迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌均具有较好的抵抗力（相对免疫保护率分别为48.5%和58.1%），二价疫苗P1V3免疫后的大菱鲆对迟缓爱德华氏菌以及鳗弧菌则具有很强的抵抗力（相对免疫保护率分别为78.8% 和93.5%），并且其保护率在统计学上与单价疫苗相比有显著性差异。因此P1V3在用来控制迟缓爱德华氏菌和鳗弧菌引起的病害中具有很好的应用潜力。 总之，FimA是迟缓爱德华氏菌的一个重要的毒力因子，在细菌侵染鱼体过程中发挥重要的作用，rFimA具有佐剂效应，同时作为疫苗具有很好的免疫保护效应。构建的无毒株二价疫苗P1V3免疫鱼体后可以显著提高鱼体抗迟缓爱德华氏菌以及鳗弧菌的感染，具有很好的交叉保护效应。 因此亚单位疫苗rFimA以及无毒株活疫苗P1V3在未来迟缓爱德华氏菌病预防中具有很高的应用潜力。