| Summary: | Bu tez çalışmasında Candida antarctica lipazını nanoparçacıklara tutuklayarak lipaz aktivitesini ve enantiyoseçimliliğini arttırmak hedeflenmiştir. Bu amaç doğrultusunda, öncelikle nanoparçacıklar üretilerek Candida antarctica lipazı kovalent bağlama yöntemi ile üretilen nanoparçacıklara tutuklanmıştır. Tutuklanmış enzimler (R,S)-1-feniletanolün enantiyseçimli transesterleşme tepkimesinde biyokatalizör olarak kullanılmıştır. Çalışmanın birinci bölümünde, grafen oksit (GO), demir oksit (Fe3O4), grafen oksit/demir oksit nanokompoziti (GO/Fe3O4), manyetik kitosan (Fe3O4/KT) ve grafen oksit/demir oksit/kitosan nanokompoziti (GO/Fe3O4/KT) üretilmiştir. İkinci bölümde, üretilen nanoparçacıklar öncelikle çapraz bağlayıcılardan glutaraldehit (GA) veya epiklorohidrin (EPH) ile aktive edilmiş ve Candida antarctica lipazı kovalent bağlama yöntemi ile bu nanoparçacıklara tutuklanmıştır. Saf ve enzim yüklü nanoparçacıların yapısı taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile karakterize edilmiştir. Tutuklanmış ve serbest enzim aktivitesinin sıcaklık, pH, tutuklama süresi, yüzey aktif madde derişimi ve çapraz bağlayıcı derişiminden nasıl etkilendiği incelenmiştir. Serbest enzimin 30 ℃ ve pH 6’da max. aktivitesi 35 U bulunmuştur. GO, Fe3O4 ve GO/Fe3O4 üzerine tutuklanmış enzimlerin sırasıyla uygun koşullardaki aktiviteleri 28.98 U (T=40℃, pH=6, tutuklama süresi=16 saat), 26.95 U (T=40℃, pH=7, tutuklama süresi=16 saat) ve 24.8 U (T=40℃, pH=8, tutuklama süresi=12 saat) bulunmuştur. Bu değerler tutuklama esnasında 250 mM GA kulanıldığında elde edilmiştir. Yapılan deneyler sonucu çapraz bağlayıcı GA’nın EPH’den daha iyi aktivite sonuçları verdiği görülmüş ve daha sonraki deneylerde GA ile çalışılmıştır. Tween 80 ve Triton X-100 yüzey aktif maddelerinin aktiviteye önemli bir katkıda bulunmadığı ve bazı durumlarda enzimin konformasyonel yapısını etkileyerek aktivite kaybına sebep olduğu görülmüştür. Son bölümde ise, uygun koşullarda üretilen tutuklanmış enzimler (R,S)-1-feniletanolün saf enantiyomerlerini elde etmek için kullanılmıştır. En ...
|
|---|