南极中山站沉积物宏基因组文库的构建及碱性蛋白酶基因ACPRO001的克隆、表达和性质分析

• Main Author: 张映京
• Other Authors: 李庆阁, 曾润颖
• Format: Thesis
• Language: Chinese
• Published: 2009
• Subjects: 宏基因组; 碱性蛋白酶; 定向进化; metagenome; alkaline protease; directed evolution; Zhongshan; Zhongshan Station; Antarc*; Antarctica
• Online Access: http://dspace.xmu.edu.cn/handle/2288/46005

本文从南极中山站排污入海口（ZSS）沉积物样品中直接提取环境样品微生物总DNA，大小在48Kb以上。经过吹打调整DNA片段大小（到30-45Kb）后构建了ZScosmid宏基因组文库，获得了约6500个阳性克隆子。推算该DNA文库的总容量为228Mb，可以覆盖约10株类似E.coli菌株的总基因组。 采用蛋白酶活性筛选功能板筛选该文库我们得到了一个编号为1146的阳性克隆能够分解底物脱脂牛奶，在筛选平板上产生清晰的透明水解圈。DNA测序后分析表明该克隆外源DNA包含一个由425个氨基酸编码组成的蛋白质的完整的开放阅读框(ORF)，GC含量为50.6%。BLAST软件分析该外源DNA包含一个完....