Otimizando a detecção e identificação de larvas, sementes e adultos de Crassostrea SPP. (SACCO 1897) através de marcadores moleculares

• Main Author: Ludwig, Sandra
• Other Authors: Boeger, Walter Antonio Pereira, 1957-, Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em Zoologia
• Format: Thesis
• Language: Portuguese
• Published: 2011
• Subjects: Teses; Crassostrea gigas
• Online Access: http://hdl.handle.net/1884/26160

Resumo: A ostreicultura no Brasil depende basicamente do cultivo de tres especies de Crassostrea, Crassostrea rhizophorae e Crassostrea brasiliana, especies nativas, e Crassostrea gigas, uma especie introduzida. A introducao de especies nao-nativas, tal como C. gigas, pode ter consequencias ecologicas e/ou economicas, por isso sua introducao e proibida por leis no pais. Devido as dificuldades na producao de larvas e sementes de ostras nativas em laboratorio, os cultivadores buscam tecnicas que os permitam atender a demanda de sementes para producao. Assim, o objetivo deste trabalho e desenvolver uma ferramenta molecular capaz de detectar larvas de C. rhizophorae e de C. brasiliana em amostras de plancton e identificar sementes das mesmas especies, simultaneamente em uma unica reacao de PCR Multiplex. O protocolo de PCR Multiplex desenvolvido nesse estudo utiliza iniciadores universais para avaliar a integridade da amostra, juntamente com um par de iniciadores especificos para C. rhizophorae, outro para para C. brasiliana. Os iniciadores especificos foram desenvolvidos com base nas diferencas nucleotidicas do DNA de cada especie, resultando em uma amplificacao de fragmentos especificos para cada uma das especies de ostras. O protocolo foi avaliado quanto sua sensibilidade e especificidade, e testados na identificacao de larvas e sementes de ostras na Baia de Guaratuba, Parana, Brasil. O protocolo de PCR Multiplex foi aplicado de Janeiro a Junho de 2010 em 34 amostras de plancton, a fim de testar a aplicabilidade do metodo em detectar e identificar a presenca de larvas das especies-alvo, tambem foi aplicado em 246 sementes, no intuito de testar a capacidade de diferenciacao entre as especies. Os testes realizados, a partir do protocolo de PCR Multiplex, detectaram o DNA de C. rhizophorae em concentracoes baixas de 0.002 ng/ƒÊL, e muito mais baixo de 0.0002 ng/ ƒÊL para C. brasiliana. A PCR Multiplex desenvolvida detectou e identificou com sucesso a presenca de DNA de uma unica larva de cada especie nativa, ...