Diagnostiske verktøy for måling av cytokiner hos rein (Rangifer tarandus tarandus)

• Main Author: Frøvoll, Tuva Løken
• Other Authors: Hege Lund, Kari Lybeck, Ingebjørg H. Nymo, Siv Klevar, Shokouh Makvandi-Nejad
• Format: Master Thesis
• Language: Norwegian Bokmål
• Published: Norwegian University of Life Sciences 2023
• Subjects: Finnes; Neves; Gjerde; Rangifer tarandus
• Online Access: https://hdl.handle.net/11250/3066233

Bakgrunn for studien: Det finnes i dag ingen kommersielle metoder for deteksjon av cytokiner hos rein (Rangifer tarandus tarandus). Økt smittepress i forbindelse med at tamreinen oftere fôres og holdes i gjerde, har medført et større behov for diagnostiske verktøy for å kartlegge reinhelsen. Mål: Målet med studien var å kartlegge om, og i hvor stor grad, en kulebaserte multipleks cytokinanalyse beregnet til storfe, kunne brukes på prøver fra rein, og vurdere potensialet til de ulike cytokinene som biomarkører. I tillegg ville det bli designet primere for å måle genuttrykket for de samme cytokinene, som et sammenligningsgrunnlag for den multiplekse cytokinanalysen. Metoder: Perifere mononukleære celler (PBMC) fra rein og storfe (Bos taurus) ble isolert fra blod, og stimulert in vitro med mitogenene pokeweed mitogen (PWM), phytohemagglutinin (PHA), concanavalin A (ConA), lipopolysakkard (LPS), staphylococcal enterotoxin B (SEB) og phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) i kombinasjon med ionomycin (I) i 6 eller 24 timer for å indusere cytokinrespons. Cytokinnivåene for interleukin (IL)-6, IL-8, IL-10, IL-17, tumor nekrose faktor-alfa (TNF-α) og interferon-gamma (IFN-γ) ble målt ved bruk av den kulebaserte multiplekse analysemetoden, MILLIPLEX® Bovine Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel 1. Resultatene ble sammenlignet mot genuttrykket målt ved sanntids-polymerase kjedereaksjon (qPCR). For å kunne utføre qPCR ble det designet primere til både rein og storfe for IL-8, IL-10, IL-17, TNF-α og IFN-γ, med beta-2-microglobulin (β2M) som referansegen. Cytokinnivåer ble også målt i serumprøver fra to tidligere utførte eksperimentelle smitteforsøk på rein, med hhv. Orf-virus (ORFV) (Tryland et al., 2013) og cervid herpesvirus 2 (CvHV2) (das Neves et al., 2009a). Resultater: Resultatene indikerte at cytokinene IL-8, IL-10, IL-17, TNF-α og IFN-γ detekteres i prøver fra rein med MILLIPLEX® Bovine Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel 1. Stimulering med PMA-I viste seg å være mest optimal for å aktivere cytokinproduksjon, og ...