Estudo da produção de fragmento de anticorpo monoclonal scFv anti-Stx2 utilizando linhagens de Escherichia coli recombinante

• Main Author: Carvalho, Rafaela Vieira de UNIFESP
• Other Authors: Pradella, José Geraldo da Cruz, http://lattes.cnpq.br/0367501871287580, http://lattes.cnpq.br/4428559309561977
• Format: Bachelor Thesis
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de São Paulo 2022
• Subjects: STEC; Toxina Shiga; E. coli recombinante; Fragmento de anticorpo monoclonal scFv; Meio de cultura; Arctic; Larga
• Online Access: https://repositorio.unifesp.br/11600/65456

Linhagens de Escherichia coli produtoras da toxina de Shiga (STEC) podem causar colite hemorrágica e síndrome hemolítico-urêmica pela produção da citotoxina de Shiga (Stx), uma toxina que inibe a síntese proteica por agir no rRNA, levando à morte celular. Por não existir antídoto disponível, a terapia atual envolve apenas o tratamento dos sintomas. Fragmentos de anticorpos monoclonais tem se tornado uma importante classe de biofármacos disponíveis atualmente, apresentando diversas vantagens sobre o anticorpo convencional, como seu tamanho reduzido, ideal para a produção em larga escala em sistemas microbianos, tecnologias de processamento robustas e escalabilidade para biorreatores de grande volume. Fragmentos de anticorpos monoclonais recombinantes scFv contra toxinas Stx foram descritos possuindo atividade neutralizante para uso em diagnóstico e terapêutico contra STEC. O presente trabalho teve como objetivo estudar a obtenção do fragmento de anticorpo scFv anti-Stx2 variando-se os sistemas de expressão E. coli BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLysS e Arctic Express (DE3) recombinantes, e também realizar otimização do meio de cultura para obtenção de um maior rendimento do fragmento. De modo geral a linhagem Arctic se mostrou mais promissora para a obtenção do fragmento, contudo novos ensaios serão necessários para validação dos resultados obtidos. Além disso, adição de IPTG a 1 M e 2YT a 5g/L no momento na indução, resultou em um rendimento maior da proteína de interesse. Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) strains can cause hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome by producing Shiga cytotoxin (Stx), a toxin that inhibits protein synthesis by acting on rRNA, leading to cell death. Because there is no antidote available, current therapy only involves treating the symptoms. Monoclonal antibody fragments have become an important class of biopharmaceuticals currently available, presenting several advantages over the conventional antibody, such as its reduced size, ideal for large-scale production in ...