Leishmanioses e a busca de meatólitos seundários de origem marinha: uma abordagem química e biológica

• Main Author: Clementino, Leandro da Costa
• Other Authors: Universidade Estadual Paulista (UNESP)
• Format: Master Thesis
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual Paulista (UNESP) 2017
• Subjects: Ascoseria mirabilis; Cystosphaera jacquinotii; Fungos endofíticos; Leishmania amazonensis; Endophytic fungi; Austral; Torna; antartic*
• Online Access: http://hdl.handle.net/11449/151451

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Pós-graduação em Biotecnologia - IQ As leishmanioses acometem mais de 12 milhões de pessoas no mundo, principalmente em países da América Latina, sobretudo populações com acesso precário à infraestrutura. A terapêutica atual empregada para estas doenças dispõe de poucas opções e com elevada toxicidade, portanto, torna-se necessária a busca por novos fármacos antileishmaniais, sendo as fontes naturais uma fonte inesgotável de metabólitos bioativos. Neste sentido, este projeto buscou substâncias presentes em macroalgas e fungos endofíticos associados provenientes do continente Antártico que possuam atividade leishmanicida. Coletas algais foram realizadas durante o verão austral na missão XXXIII pelo Proantar, sendo obtidos extratos e fungos endofíticos associados às algas Ascoseira mirabilis e Cystosphaera jacquinotii. Os extratos hexânicos e etanólicos das algas apresentaram atividade leishmanicida, sendo os extratos hexânicos de ambas, escolhidos para fracionamento e caracterização química. O fracionamento levou a quatro frações, as quais apresentaram atividade igual ou superior à observada no extrato. As frações F3 e F6 do extrato hexânico da alga A. mirabilis foram analisadas por CLAE-EM, CLAE-DAD e RMN de 1H e, posteriormente, sub-fracionadas. Verificamos a presença do diisobutilftalato como constituinte majoritário destas frações, sendo que a presença desta substância também foi observada na subfração AmF6.2, obtida a partir de F6, podendo ser esta responsável pela atividade leishmanicida observada. Foram isolados cinco fungos endofíticos, sendo dois associados à alga A. mirabilis e três, à alga C. jacquinotii. Estes microrganismos foram cultivados em meio sólido e seus extratos testados quando à atividade leishmanicida. Um dos extratos apresentou bioatividade, sendo então, fracionado. As frações F5 e F6 que ainda apresentavam atividade, foram sub-fracionadas, sendo identificada a subfração FeF6.2 com a atividade antiparasitária. O fungo produtor de metabólitos bioativos leishmanicida AmpdbaMI2 foi identificado como pertencente ao gênero Aspergillus, tratando-se do primeiro registro deste fungo associado à macroalga A. mirabilis. Leishmaniasis affects more than 12 million people worldwide mainly in countries of Latin America, especially in populations with precarious acces to health and infrastructure. The current therapy for these diseases has few drug options, which present several drawbacks inluding high toxicity; thus, is mandatory the search for new antileishmanial drugs. For this, natural sources are promissor due to their great diversity and huge number of potential bioactive metabolites. Therefore, this project aimed to identify antileishmanial substances present in antartic macroalgae and their associated endophytic fungi. The algae here analysed were collected during the austral summer at Proantar mission XXXIII. Extracts from the species Ascoseira mirabilis and Cystosphaera jacquinotii were obtained as well as from their endophitic fungi. The hexanic and ethanolic extracts from the algae showed leishmanicidal activity. We have chosen the hexanic fraction to start further characterization of the analysed bioctive extracts. Fractionation of hexanic extract led to four fractions that presented superior or equal activity when compared to that observed in the extract. The most active fractions of A. mirabilis, F3 and F6, were analyzed by HPLC-MS, HPLC-DAD and 1H NMR and then sub-fractionated. We observed the presence of diisobutyl phthalate as their major constituent, as well as in the sub-fraction AmF6.2 obtained from F6, which might be related to the observed leishmanicidal activity. Two endophytic fungi were obtained from A. mirabilis and three, from C. jacquinotii. The endophytic fungi were grown in solid medium and their extracts tested for leishmanicidal activity. Only one extract obtained from the fungi AmpdbaMI2 showed bioactivity and its fractions F5 and F6 and subfraction FeF6 kept its bioactivity. The fungus responsible for the antiparasitic activity was molecular identified as belonging to the genus Aspergillus, which is the first record of this fungus associated to the macroalgae A. mirabilis.