Identifisering av potensielle virulensfaktorer hos Pasteurella atlantica gv. salmonicida

• Main Author: Baug, Phillip
• Format: Master Thesis
• Language: Norwegian Bokmål
• Published: The University of Bergen 2024
• Subjects: 759906; Salmo salar
• Online Access: https://hdl.handle.net/11250/3138790

Pasteurellose hos atlantisk laks (Salmo salar) forårsaket av P. atlantica genomvar salmonicida har siden 2018 blitt en betydelig trussel mot fiskevelferden og den bærekraftige produksjonen i norsk akvakultur. Det er derfor et stort behov for en kommersiell vaksine mot sykdommen. Til nå har man lite kunnskap om overflateproteiner, virulensfaktorer og immunogene komponenter hos denne bakterien. Denne kunnskapen er kritisk for valg av vaksineisolater og strategier, og for å forstå hvordan denne bakterien forårsaker sykdom. I denne masteroppgaven ble potensielle virulensfaktorer og immunogene komponenter hos P. atlantica gv. salmonicida identifisert og produsert rekombinant i Escherichia coli. Antigenisitet av rekombinante proteiner ble undersøkt ved Western blotting. Ett rekombinant YopT-lignende protein ble undersøkt for funksjon ved transfeksjon av cellelinjen BK (en hittil ubeskrevet cellelinje ved Fiskeimmunologigruppen ved Universitetet i Bergen). Isolat av P. atlantica gv. salmonicida og P. atlantica gv. cyclopteri ble dyrket ved ulike temperaturer for å undersøke hvordan temperatur påvirket vekst og proteinuttrykk. Studien avdekket at P. atlantica gv. salmonicida og P. atlantica gv. cyclopteri vokser best ved 20 - 30 °C. Videre ble in silico analyser benyttet for å etablere en liste over potensielle virulensfaktorer og immunogene komponenter hos P. atlantica gv. salmonicida. Basert på disse resultatene ble et YopT-lignende protein og et YadA-lignende protein valgt for å produseres rekombinant. Det YopT-lignende proteinet ble transfektert inn i BK-celler, for å undersøke cytotoksiske effekter gjennom ødeleggelse av aktinfilamentene i cellene. Bare det YopT-lignende proteinet ble vellykket produsert rekombinant i Escherichia coli og bundet til 6xHisTag-antistoff. Dette proteinet viste ingen reaktivitet mot serum fra P. atlantica gv. salmonicida vaksinert fisk, noe som indikerer at dette proteinet ikke representerer de primære antigenene som gjenkjennes av fiskens immunforsvar. Resultatene kunne ikke vise ...