| Summary: | A Ordem Rickettsiales abriga um grupo de parasitas intracelulares obrigat?rios, respons?veis por v?rias doen?as humanas conhecidas como riquetsioses. Artr?podes hemat?fagos e seus hospedeiros s?o respons?veis pela dissemina??o da doen?a ao homem. Desde a d?cada de 20, o Brasil apresenta hist?rico de doen?a riquetsial, onde a febre maculosa Brasileira destaca-se como a mais comum e a mais letal dessas riquetsioses. Embora os m?todos sorol?gicos ainda sejam os mais indicados na confirma??o da doen?a, o emprego de t?cnicas de biologia molecular vem modelando uma nova realidade ao diagnosticar e detectar cada vez mais pat?genos espec?ficos em todo o mundo. O munic?pio de Santa Cruz do Escalvado, localizado no Vale do Piranga, Zona da Mata, Minas Gerais, ? considerado foco antigo para riquetsioses. Dentro do munic?pio, na localidade de Soberbo foi constru?da em 2004, a Usina Hidrel?trica de Candonga, alterando assim, a paisagem natural da regi?o. Com o objetivo de compreender a atual situa??o desse munic?pio, dentro de uma concep??o de ocupa??o e transforma??o do espa?o geogr?fico como nosso marco te?rico, buscamos avaliar o n?vel de transmiss?o de riquetsioses na popula??o de animais dom?sticos e silvestres coletados em duas localidades pertencentes ao munic?pio, utilizando m?todos sorol?gicos e ferramentas da biologia molecular. Foram capturados 94 vertebrados silvestres dentre eles, os roedores Rattus rattus, Nectomys squamipes e Oryzomys subflavus, al?m de gamb?s Didelphis aurita. Dos roedores capturados, foram obtidos tecidos (f?gado e ba?o). Foram coletados 427 ectoparasitos, entre Amblyomma cajennense, Rhipicephalus sanguineus, Anocentor nitens, Boophilus microplus e pulgas da esp?cie Ctenocephalides canis em animais dom?sticos (c?es e eq?inos). Foram tamb?m coletadas 166 amostras de soro dos roedores e dos animais dom?sticos, sendo estas submetidas ? rea??o de imunofluoresc?ncia indireta utilizando ant?genos espec?ficos para Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia bellii e Rickettsia amblyommii. Ap?s a extra??o de DNA das amostras de tecidos de roedores e de pools dos ectoparasitos coletados, foi realizada a amplifica??o atrav?s de PCR duplex, contendo pares de oligonucleot?deos iniciadores g?nero-espec?ficos (CS e 17kDa), sendo o produto obtido reamplificado com um par de iniciadores internos de 17 kDa (full nested PCR). Os produtos amplificados foram visualizados em gel de poliacrilamida 8% corado pela prata e as amostras positivas foram purificadas, seq?enciadas e comparadas com outras seq??ncias depositadas no GenBank. A an?lise das seq??ncias obtidas de tecidos de roedores permitiu a identifica??o do g?nero Rickettsia em pools de ectoparasitos das esp?cies A. cajennense, A. nitens e B. microplus coletados em eq?inos e da esp?cie R. sanguineus em pulgas coletadas em c?es. Os dados sorol?gicos apontam o R. rattus como o ?nico roedor sororeativo com 81,25% de positividade para riqu?tsias do Grupo da febre maculosa, comparado aos demais roedores capturados, cujos resultados sorol?gicos foram negativos. Foi tamb?m encontrada uma freq??ncia sorol?gica relativamente expressiva entre os gamb?s capturados apresentando 14,3% para R. rickettsii e 14,3% para riqu?tsias do Grupo da febre maculosa (GFM). Os eq??deos apresentaram 5,4% de sororeatividade para R. bellii e 2,7% para riqu?tsias do GFM, enquanto os c?es apresentaram somente 2% para R. rickettsii e 2% para R. parkeri. The Order Rickettsiales evolves a group of obligate intracellular parasites, responsible for many diseases known as rickettsioses. Hematophagous arthropods and their hosts are responsible for the disease dissemination to man. Since the 20?s, Brazil shows a description of the rickettsial disease, where the Brazilian spotted fever appears as the most common and with more high case-fatality ratio rickettsiose. Although serologic methods continues to be most indicated in the disease?s confirmation, the use of molecular biology techniques has been molding a new reality in diagnoses and detect even more specific pathogens in the whole wide world. The city of Santa Cruz do Escalvado, located in the Piranga Valley, Zona da Mata, Minas Gerais, is considered an old focus for rickettsioses. In the city, in Soberbo, was built in 2004 the hydroelectric UHE-Candonga, modifying then, the natural landscape of the place. Trying to comprehend the current situation of this place, considering the occupation and transformation of the geographic space, we have investigated the level of rickettsioses infection in domestic and wild animal?s population of two localities of the city, by using serologic and molecular biology methods. There were captured 94 wild vertebrates among them, the rodent Rattus rattus, Nectomys squamipes and Oryzomys subfalus, and also Didelphis marsupialis opossum. Of the rodents captured, was made a tissue collection (liver and spleen). There were collected 427 ectoparasites among Amblyomma cajennense, Rhipicephalus sanguineus, Anocentor nitens, Boophilus microplus and Ctenocephalides canis fleas in domestic animals (canines and equines). There were also collected 166 samples of serum of rodents and of domestic animals, and those samples were evaluated through indirect immunofluorescence reaction using specific antigen for Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettisia bellii, and Rickettisia amblyommii. DNA obtained from rodent tissue samples and from pools of collected ectoparasites, was amplified by a PCR duplex system, with oligonucleotides primers pairs (CS and 17kDa genes), and the obtained product was re-amplified with a pair of inner primers for 17 kDa gene (full nested PCR). The amplified product were visualized in polyacrylamide gel 8% silver stained and the positive samples were purified, sequenced, and compared with others sequences in the GenBank. The analysis of the sequences obtained from rodent tissues allowed the identification of Rickettsia ssp sequence, as well as in pools of ectoparasites from A. cajennense, A. nitens and B. microplus species collected in equines and the R. sanguineus and fleas collected in canines. The serologic data points the R. rattus as the only rodent with 81,25% of seroreactivity to spotted fever-group rickettsiae (SFG) when compared to the rest of captured rodents, with negative serologic results. There were also found a relatively expressive serologic frequency among opossums captured with 14,3% to R. rickettsii and 14,3% to spotted fever-group rickettsiae (SFG). The equines showed 5,4% of seroreactivity to R. bellii and 2,7% to spotted fever-group rickettsiae (SFG), while canines showed only 2% to R. rickettsii and 2% to R. parkeri.
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