Pesquisa de Rickettsia em animais sinantr?picos e dom?sticos em seus ectoparasitas em duas ?reas de baixa endemicidade para febre maculosa brasileira da regi?o leste de Minas Gerais, de 2005-2007. - Milagres, Bruno Silva (Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Biol?gicas. N?cleo de Pesquisas em Ci?ncias Biol?gicas, Pr?-Reitoria de Pesquisa e P?s Gradua??o, Universidade Federal de Ouro Preto., 2010)
A febre maculosa ? uma doen?a transmitida por carrapatos e tem como agente etiol?gico bact?rias do g?nero Rickettsiia, envolvendo no ciclo da Febre Maculosa Brasileira, c?es, roedores e marsupiais como reservat?rios vertebrados e carrapatos e pulgas como seus vetores invertebrados com os humanos atuando como hospedeiros acidentais, e constituindo elo terminal no ciclo dessas bact?rias. A patogenicidade atribu?da a estes microorganismos ? ainda desconhecida para varias esp?cies, bem como os fatores de risco, demogr?ficos e sazonais relacionados ?s respectivas doen?as ocasionadas. Para a realiza??o deste estudo, foram selecionados dois munic?pios do estado de Minas Gerais com pr?vio hist?rico de ocorr?ncia destas enfermidade em humanos, sendo dois casos recentes no munic?pio de Pingo D'?gua, localizado na regi?o do Vale do Rio Doce e o munic?pio de Santa Cruz do Escalvado, localizado no Vale do Piranga, Zona da Mata Mineira, estado de Minas Gerais foco antigo para riquetsioses, que sofreu altera??o recente em sua paisagem natural, devido a constru??o de uma usina hidrel?trica na localidade de Soberbo no ano de 2004. Assim, com o objetivo de melhor compreender a atual situa??o epidemiol?gica das riquetsioses nesses munic?pios, dentro de uma concep??o de ocupa??o e transforma??o do espa?o geogr?fico por a??o antr?pica, buscou-se avaliar o n?vel de contato destes agentes nas popula??es de animais dom?sticos e sinantr?picos, realizaram-se ensaios sorol?gicos e ferramentas da biologia molecular. Eq?inos, c?es, roedores e gamb?s foram capturados e identificados, tendo sido ainda coletadas amostras de soro bem como ectoparasitas. Dos roedores capturados foram colhidas amostras de tecidos (f?gado e ba?o), e dos gamb?s amostras de sangue total, sendo realizado ainda nestes animais colheita de material por swab anal. Das amostras de sangue, tecidos, ectoparasitas e swabs anal extraiu-se DNA, que foram amplificadas atrav?s de PCR usando oligonucleot?deos iniciadores para amplifica??o g?nero espec?fica do gene da citrato sintase (gltA). Os produtos amplificados obtidos foram visualizados em gel de agarose a 1,5%. Apenas amostras de ectoparasitas das esp?cies Amblyomma cajennense coletados de c?es, eq?inos, gamb?s-Didelphis aurita e Ctenocefalides canis e Ctenocefalides felis em pulgas de gamb?s apresentaram resultados positivos ? PCR. As amostras de soros de animais silvestres e dom?sticos foram investigadas quanto ? presen?a de anticorpos reativos ? ant?genos de Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia belli, Ricketssia rhipicephali e Rickettsia amblyommii pela Rea??o de Imunofluoresc?ncia Indireta (RIFI). Amostras que apresentaram t?tulos iguais ou superiores a 1:64 foram considerados positivas para Rickettsia. No munic?pio de Pingo D? ?gua das 46 amostras de soros de roedores analisadas, dentre estas 31 da esp?cie Rattus rattus, 7 Oryzomys subflavus, 7 Nectomys squamipes e 1 Bolomys sp. 26 (83,88%) das amostras de R. rattus, seis (85,72%) das amostras de Oryzomys e Nectomys e a ?nica amostra de soro de Bolomys analisada apresentaram resultados positivos para bacterias do grupo da febre maculosa. No munic?pio de Santa Cruz do Escalvado das 62 amostras de soro de roedores analisadas, dentre estas 32 da esp?cie R. rattus, 2 Oryzomys subflavus, e 23 Nectomys squamipes e 5 Akodon sp. 30 amostras de R. rattus testadas, 30 foram reativas ? RIFI para Rickettsia do Grupo das Febres Maculosas, totalizando 93,75% das amostras. Os dados sorol?gicos obtidos nos munic?pios de Pingo D? ?gua e Santa Cruz do Escalvado, apontam a esp?cie R. rattus como a mais representativa entre os roedores, o que a credencia para participa??o no ciclo enzo?tico das riquetsioses nas referidas regi?es. Levando em considera??o o agravante de essa ser a esp?cie mais sinantr?pica em rela??o ?s outras estudadas neste projeto, ? importante atentar-se para o poss?vel risco de dispers?o de organismos do g?nero Rickettsia por esses animais no munic?pio. Foram analisadas ainda 42 amostras de soros de eq?inos e 24 amostras de soros de c?es provenientes de Pingo D? ?gua, com reatividade sorol?gica contra riqu?tsias do GFM em 16 (38,09%) dentre as amostras de eq?inos e em duas (8,33%) dentre as amostras de c?es. Em Santa Cruz do Escalvado foram analisadas 66 amostras de soros de eq?inos e 67 amostras de soros de c?es, verificando-se uma sororeatividade contra riqu?tsias do GFM em dez (15,15%) dentre as amostras de soros de eq?inos e em 14 (20,89%) dentre as amostras de soros de c?es. Das 38 amostras de soro de D. aurita coletados no munic?pio de Santa Cruz do Escalvado, em 16 verificou-se a presen?a de Rickettsia, sendo que em 42,1% dos soros foram reativos contra R. rickettsii, 39,5% contra R. parkeri, 18,4% contra de R. amblyommi e 2,6% contra R. felis. Os achados sorol?gicos e de biologia molecular obtidos neste trabalho recomendam a manuten??o de uma vigil?ncia epidemiol?gica permanente nos munic?pios estudados, bem como em seu entorno, buscando-se desta maneira evitar a ocorr?ncia de novos casos humanos causada pela invas?o destes focos naturais pelo homem ou pela dispers?o de potenciais reservat?rios e vetores de agentes riquetsiais para novas ?reas do estado. Spotted fever is a disease transmitted by ticks presenting as his etiological agent bacteria of the genus Rickettsia. Involved in her natural cycle, dogs, rodents, and marsupials actuated as vertebrate reservoirs, been ticks, and fleas the invertebrates vectors. Humans actuating as accidental hosts are becoming the final link in the cycle of these bacteria. The pathogenicity attributed to these microorganisms is still unknown for several of the Rickettsia species, including the involved factors of risk and the demographic and seasonal factors related. For this study, we selected two counties in the state of Minas Gerais, Brazil, that have prior history of occurrence of this disease in humans: Pingo D'?gua, located in Vale do Rio Doce, with two recent cases reported, and Santa Cruz do Escalvado, located in Vale do Piranga, Zona da Mata Mineira, a former focus for rickettsial diseases, which has suffered recent change in their natural landscape due to the construction of a hydroelectric plant in the town of Superb in 2004. Thus, in order to better understand the current epidemiological situation of the rickettsial diseases in these municipalities, under a conception of occupation and transformation of geographic space by anthropic actions, we sought to evaluate the level of transmission of these agents in populations of domestic and synanthropic animals, realizing serological and molecular biology assays. Horses, dogs, rodents and opossums were captured and identified, from whom were collected serum samples and ectoparasites. From rodents captured were collected samples of tissues (liver and spleen). From opossums were collected samples of whole blood and anal swab. From blood, tissues, ectoparasites, and anal swabs were extracted DNA samples, which were subsequently amplified by PCR using primers for amplification of Rickettsia genus-specific citrate synthase gene (gltA). The amplified products obtained were visualized in agarose gel 1.5%. Only samples of parasites of the species Amblyomma cajennense collected from dogs, horses, and opossums, and fleas (Ctenocefalides canis and Ctenocefalides felis) collected from opossums tested positive by PCR. Serum samples from wild and domestic animals were investigated by Immunofluorescence Assay (IFA) for the presence of antibodies reactive to antigens of Rickettsia rickettsii, Rickettsia parkeri, Rickettsia felis, Rickettsia belli, Rickettsia rhipicephali and Rickettsia amblyommii. Samples that had titers equal or greater than 1:64 in the IFA were considered positive for Rickettsia. In the municipality of Pingo D??gua, from 46 serum samples rodents tested, among these 31 species of Rattus rattus, seven Oryzomys subflavus, seven Nectomys squamipes, and one Bolomys sp., 26 (83.88%) samples of R. rattus, six (85.72%) samples of Oryzomys and Nectomys, and the single serum sample of Bolomys examined were positive for bacteria of the spotted fever group (SFG). In Santa Cruz do Escalvado, serum samples from 62 rodents tested, among these 32 species of R. rattus, two Oryzomys subflavus and five Nectomys squamipes, and 23 Akodon sp., 30 samples of R.rattus were reactive by IFA for Rickettsia agents from the SFG, totaling 93.75% of the samples. The serological data obtained in the municipalities of Pingo D'?gua and Santa Cruz do Escalvado, indicated that the species R. rattus is the most representative among the rodents, which accredits to participate in the enzootic cycle of rickettsial diseases in these regions. Taking into account the aggravating factor that is the most synanthropic species over all others studied in this project, it is important to pay attention to the possible risk of dispersal of the genus Rickettsia by these animals in the municipalities. We also analyzed serum samples of 42 horses and 24 serum samples of dogs from Pingo D'?gua, which showed serological reactivity against rickettsiae from SFG. Sixteen (38.09%) among the samples from horses and two (8, 33%) among the samples of dogs tested showed positive results. In Santa Cruz do Escalvado were we analyzed 66 serum samples from horses and 67 serum samples from dogs, were found a seroreactivity against rickettsiae organisms of SFG in ten (15.15%) among the serum samples of horses and in 14 (20 89%) among the serum samples of dogs tested. Of 38 serum samples from D. aurita collected in Santa Cruz do Escalvado, in 16 were verified the response against Rickettsia, been 42.1% of sera reactive against R. rickettsii, 39.5% against R. parkeri, 18.4% against R. amblyomma and 2.6% against R. felis. The findings of serological and molecular biology in this work recommend the maintenance of effective epidemiological surveillance in the municipalities studied, as well as its surroundings, searching in this way avoid the occurrence of new human cases of outbreaks caused by invasion by man or by natural dispersal of potential reservoirs and vectors for Rickettsia to new areas of the state.