Caracterização da enzima glutationa s-transferase alfa 1.2 recombinante de ostra Crassostrea gigas (Thunberg, 1793)

• Main Author: Deconto, Vanessa Schadeck
• Other Authors: Bainy, Afonso Celso Dias, Zacchi, Flávia Lucena, Universidade Federal de Santa Catarina
• Format: Master Thesis
• Language: Portuguese
• Published: 2022
• Subjects: Bioquímica; Biomarcadores; Glutationa; Ostra-do-pacífico; Crassostrea gigas
• Online Access: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/236850

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2022. As Glutationa S-transferase (GSTs) são uma família de enzimas de biotransformação de fase II envolvidas na proteção contra vários xenobióticos. Suas diferentes isoformas são utilizadas como biomarcadores de contaminação aquática em diversos modelos animais, como no caso da ostra Crassostrea gigas, organismo utilizado neste estudo. A classe alfa das GSTs é conhecida por participar no metabolismo de diferentes compostos endógenos em vertebrados, além da sua reconhecida função na biotransformação de xenobióticos. Porém, pouco se sabe sobre as GSTs de C. gigas e as possíveis funções de cada classe. Em vista disso, este estudo visou realizar a caracterização estrutural e funcional de uma isoforma da classe alfa de GST (CgGSTA 1.2). Foram realizadas análises in silico por biologia computacional (modelagem tridimensional e docking molecular) a fim de contribuir com um direcionamento para os experimentos in vitro de cinética enzimática. A modelagem tridimensional da proteína foi realizada pelos programas I-TASSER e HADDOCK. A análise de docking molecular foi realizada pelo SwissDock utilizando as moléculas de glutationa reduzida (GSH), 1-cloro-2,4-dinitrobenzeno (CDNB) e hidroperóxido de cumeno (CHP) como ligantes. As posições do ligante na cavidade da proteína foram avaliadas pela afinidade de ligação (?G), posição do ligante comparada a uma estrutura cristalográfica utilizada como controle e interações entre ligante e resíduos. Nas análises in vitro, a bactéria Escherichia coli cepa BL21 foi transformada com vetor de expressão com o gene de CgGSTA1.2. A proteína recombinante expressada foi purificada por cromatografia de afinidade por níquel, dialisada e teve a sua atividade in vitro avaliada testando substratos clássicos como CDNB e CHP. Testes com CDNB mostraram atividade de GST da enzima, e através das curvas de saturação foram estimados k? e V??? com ...