Caracterização estrutural e funcional da isoforma glutationa s-transferase ômega 2.1, recombinante, de ostra Crassostrea gigas (Thunberg, 1793)

• Main Author: Vilas Bôas, Luiz Otávio de Barros
• Other Authors: Bainy, Afonso Celso Dias, Maciel, Guilherme Razzera, Universidade Federal de Santa Catarina
• Format: Master Thesis
• Language: Portuguese
• Published: 2022
• Subjects: Bioquímica; Glutationa; Ostra-do-pacífico; Crassostrea gigas
• Online Access: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/235030

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Florianópolis, 2022. Ferramentas de biomonitoramento ambiental, como os biomarcadores, são necessárias para a identificação, avaliação e remediação do impacto antrópico em ambientes aquáticos. Enzimas dos sistemas de biotransformação de fase II, como as Glutationa S-transferases (GST), estão entre os biomarcadores clássicos. Crassostrea gigas é a ostra mais cultivada do mundo e devido às suas características como organismo filtrante, séssil de ampla distribuição geográfica, tem sido frequentemente utilizada em estudos com biomarcadores. Mesmo que as GST sejam enzimas comumente estudadas em diversas espécies, pouco se sabe sobre esta família de proteínas em C. gigas. Em virtude de significativas mudanças na transcrição de genes e de atividade enzimática de GSTs da classe ômega, em ostras de aquicultura e ambientes naturais, ou expostas a hidrocarbonetos, diferentes salinidades e pH, em condições laboratoriais, o presente estudo teve como objetivo caracterizar estrutural e funcionalmente a GST Ômega 2.1 da ostra do Pacífico Crassostrea gigas (CgGSTO2.1), número de acesso XP_011429380.2 (NCBI). Um modelo tridimensional in silico dimérico foi construído para esta sequência. As análises de docking molecular geraram estimativas da afinidade por ligantes (?G) com os substratos Glutationa (GSH), Glutationa S-(2,4 dinitrobenzeno) (GDN) e Dehidroascorbato (DHA). Os valores de ?G sugerem maiores interações para GSH e GDN com GST ômega de C. gigas por meio dos resíduos Cisteína 28 (Cis28) e Lisina 55 (Lis55). Além disso, a proteína recombinante foi expressada, purificada, e uma fração foi obtida para testes de atividade. Os testes com CDNB demonstraram taxa de absorbância diferente do branco, sugerindo atividade GST, diferente da DHA, que demonstrou taxa de absorbância semelhante ao controle negativo. Novos ensaios in vitro com novas condições devem ser realizados, uma vez que as ...