Aumento de la termoestabilidad de una xilanasa activa en frío mediante ingeniería de proteínas.

• Main Author: Pinuer Pinuer, Luis Andrés
• Other Authors: Parra, Loreto, Asenjo, Juan A., Pontificia Universidad Católica de Chile. Escuela de Ingeniería
• Format: Doctoral or Postdoctoral Thesis
• Language: Spanish
• Published: 2020
• Subjects: 660.2995; Ingeniería; Catálisis; Enzimas - Aplicaciones industriales; Xilanasas; Antártica
• Online Access: https://repositorio.uc.cl/handle/11534/48402; https://doi.org/10.7764/tesisUC/ING/48402

Tesis (Doctor en Ciencias de la Ingeniería)--Pontificia Universidad Católica de Chile, 2020 Las enzimas son biocatalizadores biodegradables, no tóxicos, eficientes y selectivos, lo que le permite posicionarse como una alternativa más ecológica y sustentable a la catálisis química tradicional. Existe un grupo de enzimas denominadas enzimas activas a bajas temperaturas, las cuales son particularmente atractivas industrialmente, dado que pueden disminuir los requerimientos energéticos en los procesos industriales, reducir los riesgos de contaminación y la generación de reacciones químicas indeseables que ocurren a temperaturas más elevadas. No obstante, este tipo de enzimas generalmente presentan una baja termoestabilidad, reduciendo sus posibles usos a nivel industrial. Esto ha motivado el desarrollo de diversas técnicas de ingeniería de proteínas con el fin de estabilizar su estructura proteica. Un grupo particular de enzimas que son ampliamente utilizadas en la industria corresponden a las xilanasas, las cuales catalizan la hidrólisis de xilano, uno de los componentes principales de las paredes celulares de las plantas y, por lo tanto, poseen aplicaciones en diferentes sectores incluyendo la alimentación animal y la producción de azúcares bioactivos conocidos como xilo-oligosacáridos (XOS). El objetivo de este estudio fue aumentar la termoestabilidad de la xilanasa XyL-L, aislada desde la bacteria antártica Psychrobacter sp, mediante el uso de técnicas de ingeniería de proteínas sin sacrificar su actividad a bajas temperaturas. Primero se implementaron distintas estrategias para aumentar los niveles de expresión de XyL-L, dado a su escasa producción en los sistemas convencionales. La combinación de estrategias permitió obtener niveles de expresión adecuados para la posterior caracterización enzimática de XyL-L y las variantes generadas. Se utilizaron 2 estrategias de ingeniería de proteínas en búsqueda de mejorar la termoestabilidad de XyL-L, las cuales corresponden a la ingeniería de dominios y la ingeniería ...