Korištenje adenovirusnih vektora u istraživanju ciklusa tumorskih stanica

• Main Author: Pranjić, Blanka
• Other Authors: Kralj, Marijeta, Matulić, Maja
• Format: Master Thesis
• Language: Croatian
• Published: Sveučilište u Zagrebu. Prirodoslovno-matematički fakultet. Biološki odsjek. 2008
• Subjects: stanični ciklus; gen p21WAF1/CIP1; adenovirus; rak; cell cycle; p21WAF1/CIPgene; cancer; PRIRODNE ZNANOSTI. Biologija; NATURAL SCIENCES. Biology; sami
• Online Access: https://zir.nsk.hr/islandora/object/pmf:3557; https://urn.nsk.hr/urn:nbn:hr:217:645812; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:3557; https://repozitorij.unizg.hr/islandora/object/pmf:3557/datastream/PDF

Poremećaj regulacije staničnog ciklusa uzrokuje nekontroliranu proliferaciju stanica te je jedan od glavnih uzroka pojave raka. Postoji niz gena koji reguliraju stanični ciklus i čuvaju stanice od zloćudne preobrazbe, među kojima je gen p21WAF1/CIP1 čiji proteinski produkt je inhibitor kompleksa kinaze ovisne o ciklinu (CDK) i ciklina. Njegova povećana ekspresija u tumorskim stanicama predstavlja potencijalno oružje u genskom liječenju raka, međutim istraživanje njegove uloge ukazuje na niz kontradiktornih rezultata zbog kojih je nužno dodatno rasvijetliti njegovu ulogu u tumorskim stanicama. U ovom je radu praćen utjecaj povećane ekspresije gena p21 unošenjem njegove cDNA replikacijski nesposobnim adenovirusnim vektorima (Ad5-p21) u tumorske stanice karcinoma debelog crijeva SW480 i SW620, koje potječu od istog pacijenta, ali imaju različit stupanj zloćudne preobrazbe. Kao kontrolni vektor je korišten adenovirus s ugrađenim genom dojavljivačem (Ad5-β-gal). Oba vektora umnožena su u visokoj koncentraciji u komplementirajućim stanicama HEK 293, izolirana i pročišćena. Virusni titar je izmjeren određivanjem koncentracije ukupnih i infektivnih virusnih čestica. Djelotvornost transdukcije stanica karcinoma debelog crijeva SW620, SW480, a i HCT116 adenovirusnim vektorom Ad5-β- gal određena je praćenjem pojave plavog obojenja aktivnošću enzima β-galaktozidaze. Uočena je slabija djelotvornost transdukcije SW620 stanica putem Ad5-β-gal u odnosu na SW480 i HCT116 stanice. Također je primijećeno toksično djelovanje samog vektora na tumorske stanice, poglavito na stanice SW620. Utjecaj Ad5-p21 i Ad5-β-gal na stanični ciklus SW620 i SW480 stanica praćen je metodom protočne citometrije. Povećana ekspresija gena p21 izaziva zastoj u G1 fazi staničnog ciklusa stanica SW480. Njegova je uloga u stanicama SW620 upitna zbog snažnog utjecaja samog adenovirusnog vektora na stanični ciklus, budući da je uočen zastoj staničnog ciklusa u G2 fazi nakon zaražavanja stanica s kontrolnim vektorom Ad5-β-gal. Kako i sami adenovirusni vektori ...