Nanoscale phenomena influencing phage-displayed enzymes and emerging technologies to analyze activity towards complex substrates.
Dans certains cas, l'utilisation d'enzymes est confrontée à des défis tels que l'instabilité dans des conditions extrêmes, la purification des produits intermédiaires de chaque étape d'une réaction à plusieurs étapes, ou même la recherche de la technologie appropriée pour suivre...
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Format: | Doctoral or Postdoctoral Thesis |
Language: | English |
Published: |
2021
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ftinrsquebec:oai:espace.inrs.ca:12554 2023-05-15T14:01:59+02:00 Nanoscale phenomena influencing phage-displayed enzymes and emerging technologies to analyze activity towards complex substrates. Nahar, Sharifun 2021 application/pdf https://espace.inrs.ca/id/eprint/12554/ https://espace.inrs.ca/id/eprint/12554/1/Nahar,%20Sharifum.pdf en eng https://espace.inrs.ca/id/eprint/12554/1/Nahar,%20Sharifum.pdf Nahar, Sharifun (2021). Nanoscale phenomena influencing phage-displayed enzymes and emerging technologies to analyze activity towards complex substrates. Thèse. Québec, Doctorat en sciences de l'énergie et des matériaux, Université du Québec, Institut national de la recherche scientifique, 174 p. affichage de phages Enzyme lipase A de Bacillus subtilis (BSLA) micelles de substrat cascade d'enzymes réticulation microenvironnement glucose oxydase peroxydase de raifort lipase B de Candida antarctica (CALB) émission térahertz lait phage display Bacillus subtilis lipase A (BSLA) substrate micelles enzyme cascade crosslinking microenvironment glucose oxidase horseradish peroxidase Candida antarctica lipase B (CALB) terahertz emission milk Thèse Non évalué par les pairs 2021 ftinrsquebec 2023-02-10T11:47:19Z Dans certains cas, l'utilisation d'enzymes est confrontée à des défis tels que l'instabilité dans des conditions extrêmes, la purification des produits intermédiaires de chaque étape d'une réaction à plusieurs étapes, ou même la recherche de la technologie appropriée pour suivre la réaction de manière prédominante lorsque l'échantillon ou la matière première sont complexes. Pour répondre à ce besoin, en plus de l'ingénierie des enzymes, l’immobilisation sur un support solide est devenue un standard, bien que les tendances récentes soient plus axées sur l'ingénierie du microenvironnement. Dans cette thèse, nous avons exploré l'effet modélisé du phage sur l'activité enzymatique. Nous avons évalué l'effet des paramètres de la solution sur l'activité catalytique de la lipase A de Bacillus subtilis (BSLA) affichée par le phage. Alors que les profils d'activité en fonction du pH et de température de la BSLA n'étaient pas affectés par l'affichage du phage, la distribution à l'échelle nanométrique de la BSLA dans le tampon d'essai micellaire l'était. Cela a causé une augmentation prononcée de l'activité du phage-BSLA par rapport à l'enzyme libre, en raison de l'accumulation du phage-BSLA dans les micelles riches en substrat. Compte tenu de ce résultat, il convient de faire attention lors de la sélection d'autres enzymes/protéines par affichage phagique, car l'activité de la protéine affichée peut différer de celle de la protéine libre. Ensuite, la glucose oxydase et la peroxydase de raifort ont été immobilisées sur la protéine d'enveloppe majeure P8 du phage-BSLA, ces trois enzymes effectuant ensemble une réaction en cascade. Puis, les phages ont été réticulés par des interactions biotine-streptavidine, ce qui semble créer un microenvironnement différent autour des enzymes. Nos résultats indiquent que la cascade de trois enzymes, BSLA→GOx→HRP, peut en effet être améliorée par rapport aux enzymes libres en solution par la fixation d'un modèle sur un phage. En fin de compte, cette étude de preuve de concept suggère que ... Doctoral or Postdoctoral Thesis Antarc* Antarctica Institut national de la recherche scientifique, Québec: Espace INRS |
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Dans certains cas, l'utilisation d'enzymes est confrontée à des défis tels que l'instabilité dans des conditions extrêmes, la purification des produits intermédiaires de chaque étape d'une réaction à plusieurs étapes, ou même la recherche de la technologie appropriée pour suivre la réaction de manière prédominante lorsque l'échantillon ou la matière première sont complexes. Pour répondre à ce besoin, en plus de l'ingénierie des enzymes, l’immobilisation sur un support solide est devenue un standard, bien que les tendances récentes soient plus axées sur l'ingénierie du microenvironnement. Dans cette thèse, nous avons exploré l'effet modélisé du phage sur l'activité enzymatique. Nous avons évalué l'effet des paramètres de la solution sur l'activité catalytique de la lipase A de Bacillus subtilis (BSLA) affichée par le phage. Alors que les profils d'activité en fonction du pH et de température de la BSLA n'étaient pas affectés par l'affichage du phage, la distribution à l'échelle nanométrique de la BSLA dans le tampon d'essai micellaire l'était. Cela a causé une augmentation prononcée de l'activité du phage-BSLA par rapport à l'enzyme libre, en raison de l'accumulation du phage-BSLA dans les micelles riches en substrat. Compte tenu de ce résultat, il convient de faire attention lors de la sélection d'autres enzymes/protéines par affichage phagique, car l'activité de la protéine affichée peut différer de celle de la protéine libre. Ensuite, la glucose oxydase et la peroxydase de raifort ont été immobilisées sur la protéine d'enveloppe majeure P8 du phage-BSLA, ces trois enzymes effectuant ensemble une réaction en cascade. Puis, les phages ont été réticulés par des interactions biotine-streptavidine, ce qui semble créer un microenvironnement différent autour des enzymes. Nos résultats indiquent que la cascade de trois enzymes, BSLA→GOx→HRP, peut en effet être améliorée par rapport aux enzymes libres en solution par la fixation d'un modèle sur un phage. En fin de compte, cette étude de preuve de concept suggère que ... |
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