Expression and characterization of hypoallergenic variants of calcium-binding allergens from fish and grass pollen for allergen-specific immunotherapy

• Main Author: Zach, Doris
• Format: Master Thesis
• Language: English
• Published: 2013
• Subjects: Phl p 7; Parvalbumin; Kalzium-bindende Allergene; ortsspezifische Mutagenese; rekombinante Allergene; Allergen-spezifische Immunotherapie; calcium-binding allergens; site-directed mutagenesis; recombinant allergens; allergen-specific immunotherapy; kabeljau
• Online Access: https://resolver.obvsg.at/urn:nbn:at:at-fhcw:1-34970

Allergen-spezifische Immuntherapie (SIT) ist die einzige ursächlich ansetzende Behandlung von Allergien. Sie wird mit Allergen-Extrakten aus natürlichen Allergen-Quellen durchgeführt und birgt daher viele Nachteile. So enthalten Allergen-Extrakte zum Beispiel auch eine unbestimmbare Menge an nicht-allergenem Material, es fehlen oft wichtige Allergene oder es treten Kontaminationen mit anderen Allergen-Quellen auf. Rekombinante Allergene, hingegen, ermöglichen es, sowohl die Effizienz als auch die Spezifität von SIT zu steigern. Die Verwendung von hypoallergenen rekombinanten Allergenen wird es in Zukunft auch erlauben, die Sicherheit von SIT zu erhöhen. Durch Einbringen von vier Punktmutationen in die beiden Kalzium-Bindungsstellen vom Fischhauptallergen Parvalbumin ist es gelungen, eine hypoallergene Karpfen Parvalbumin Variante herzustellen. Dieses Molekül wird bereits in klinischen Studien getestet. In dieser Arbeit wurde nun untersucht, ob durch Einbringen vergleichbarer Mutationen in Parvalbumine anderer Fisch Spezies ebenfalls hypoallergene Moleküle geschaffen werden können. Dafür wurden rekombinante Wild type und mutierte Proteine von Hering (Clu h 1), vom Atlantischen Lachs (Sal s 1) und von der Makrele (Sco j 1) expremiert und gereinigt. Die Wildtyp und mutierten Proteine von Karpfen (Cyp c 1), Kabeljau (Gad c 1) und Thunfisch (Thu a 1) waren bereits gereinigt im Labor vorhanden. Die Analyse der IgE Reaktivität mit Patientenseren zeigte starke IgE Bindungsfähigkeit aller Wildtyp Proteine und reduzierte IgE Bindung aller Mutanten. Das Graspollen-Allergen Phl p 7 stellt ebenfalls ein Kalzium-bindendes Allergen dar. Auch bei diesem Allergen sollte im Rahmen der Arbeit untersucht werden, ob Mutation von vergleichbaren Aminosäuren wie in Parvalbumin ebenfalls zur Reduktion der IgE Reaktivität führt. Im Zuge der Klonierung von Phl p 7 gelang es eine neue Isoform zu klonieren. IgE Immunoblots zeigten, dass diese ein natürlich vorkommendes Hypoallergen darstellt. Allergen-specific immunotherapy (SIT) is the ...