Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli
Introducción. La producción de proteínas recombinantes es fundamental para el estudio funcional de las proteínas de Plasmodium falciparum. Sin embargo, las proteínas recombinantes de P. falciparum están entre las más difíciles de expresar y, cuando lo hacen, usualmente se agregan dentro de cuerpos d...
Published in: | Biomédica |
---|---|
Main Authors: | , , , |
Format: | Article in Journal/Newspaper |
Language: | English Spanish |
Published: |
Instituto Nacional de Salud
2016
|
Subjects: | |
Online Access: | https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i3.3011 https://doaj.org/article/f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 |
id |
ftdoajarticles:oai:doaj.org/article:f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 |
---|---|
record_format |
openpolar |
spelling |
ftdoajarticles:oai:doaj.org/article:f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 2023-05-15T15:12:36+02:00 Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli Ángela Patricia Guerra Eliana Patricia Calvo Moisés Wasserman Jacqueline Chaparro-Olaya 2016-04-01T00:00:00Z https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i3.3011 https://doaj.org/article/f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 EN ES eng spa Instituto Nacional de Salud http://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3011 https://doaj.org/toc/0120-4157 0120-4157 doi:10.7705/biomedica.v36i3.3011 https://doaj.org/article/f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 Biomédica: revista del Instituto Nacional de Salud, Vol 36, Iss Sup1, Pp 97-108 (2016) Plasmodium falciparum recombinant proteins Escherichia coli Medicine R Arctic medicine. Tropical medicine RC955-962 article 2016 ftdoajarticles https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i3.3011 2022-12-30T23:48:08Z Introducción. La producción de proteínas recombinantes es fundamental para el estudio funcional de las proteínas de Plasmodium falciparum. Sin embargo, las proteínas recombinantes de P. falciparum están entre las más difíciles de expresar y, cuando lo hacen, usualmente se agregan dentro de cuerpos de inclusión insolubles. Objetivo. Evaluar la producción de cuatro proteínas de P. falciparum usando como sistema de expresión dos cepas de Escherichia coli genéticamente modificadas para favorecer la producción de proteínas heterólogas y establecer una reserva de proteínas recombinantes puras y solubles, y producir anticuerpos policlonales a partir de ellas. Materiales y métodos. Las proteínas recombinantes, las cuales correspondían a secuencias parciales de PfMyoA (Miosina-A) y PfGAP50 (proteína-asociada a glideosoma de 50 kDa) y a las secuencias completas de PfMTIP (proteína de interacción con miosina-A) y PfGAP45 (proteína asociada a glideosoma de 45 kDa), fueron expresadas como proteínas de fusión con la glutatión S-transferasa y luego purificadas y usadas para producir anticuerpos policlonales en ratón. Resultados. La expresión de las proteínas recombinantes fue mucho más eficiente en la cepa BL21-CodonPlus (la cual expresa tRNAs escasos en las bacterias silvestres), que en la cepa BL21-pG-KJE8. Por el contrario, aunque la cepa BL21-pG-KJE sobreexpresa chaperonas, no redujo la formación de cuerpos de inclusión. Conclusión. El uso de cepas de E. coli genéticamente modificadas fue fundamental para alcanzar altos niveles de expresión de las cuatro proteínas recombinantes evaluadas y permitió obtener dos de ellas en forma soluble. La estrategia utilizada permitió expresar cuatro proteínas recombinantes de P. falciparum en cantidad suficiente para inmunizar ratones y producir anticuerpos policlonales y, además, conservar proteína pura y soluble de dos de ellas para ensayos futuros. Article in Journal/Newspaper Arctic Directory of Open Access Journals: DOAJ Articles Arctic Pura ENVELOPE(86.736,86.736,72.965,72.965) Biomédica 36 |
institution |
Open Polar |
collection |
Directory of Open Access Journals: DOAJ Articles |
op_collection_id |
ftdoajarticles |
language |
English Spanish |
topic |
Plasmodium falciparum recombinant proteins Escherichia coli Medicine R Arctic medicine. Tropical medicine RC955-962 |
spellingShingle |
Plasmodium falciparum recombinant proteins Escherichia coli Medicine R Arctic medicine. Tropical medicine RC955-962 Ángela Patricia Guerra Eliana Patricia Calvo Moisés Wasserman Jacqueline Chaparro-Olaya Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
topic_facet |
Plasmodium falciparum recombinant proteins Escherichia coli Medicine R Arctic medicine. Tropical medicine RC955-962 |
description |
Introducción. La producción de proteínas recombinantes es fundamental para el estudio funcional de las proteínas de Plasmodium falciparum. Sin embargo, las proteínas recombinantes de P. falciparum están entre las más difíciles de expresar y, cuando lo hacen, usualmente se agregan dentro de cuerpos de inclusión insolubles. Objetivo. Evaluar la producción de cuatro proteínas de P. falciparum usando como sistema de expresión dos cepas de Escherichia coli genéticamente modificadas para favorecer la producción de proteínas heterólogas y establecer una reserva de proteínas recombinantes puras y solubles, y producir anticuerpos policlonales a partir de ellas. Materiales y métodos. Las proteínas recombinantes, las cuales correspondían a secuencias parciales de PfMyoA (Miosina-A) y PfGAP50 (proteína-asociada a glideosoma de 50 kDa) y a las secuencias completas de PfMTIP (proteína de interacción con miosina-A) y PfGAP45 (proteína asociada a glideosoma de 45 kDa), fueron expresadas como proteínas de fusión con la glutatión S-transferasa y luego purificadas y usadas para producir anticuerpos policlonales en ratón. Resultados. La expresión de las proteínas recombinantes fue mucho más eficiente en la cepa BL21-CodonPlus (la cual expresa tRNAs escasos en las bacterias silvestres), que en la cepa BL21-pG-KJE8. Por el contrario, aunque la cepa BL21-pG-KJE sobreexpresa chaperonas, no redujo la formación de cuerpos de inclusión. Conclusión. El uso de cepas de E. coli genéticamente modificadas fue fundamental para alcanzar altos niveles de expresión de las cuatro proteínas recombinantes evaluadas y permitió obtener dos de ellas en forma soluble. La estrategia utilizada permitió expresar cuatro proteínas recombinantes de P. falciparum en cantidad suficiente para inmunizar ratones y producir anticuerpos policlonales y, además, conservar proteína pura y soluble de dos de ellas para ensayos futuros. |
format |
Article in Journal/Newspaper |
author |
Ángela Patricia Guerra Eliana Patricia Calvo Moisés Wasserman Jacqueline Chaparro-Olaya |
author_facet |
Ángela Patricia Guerra Eliana Patricia Calvo Moisés Wasserman Jacqueline Chaparro-Olaya |
author_sort |
Ángela Patricia Guerra |
title |
Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
title_short |
Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
title_full |
Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
title_fullStr |
Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
title_full_unstemmed |
Producción de proteínas recombinantes de Plasmodium falciparum en Escherichia coli |
title_sort |
producción de proteínas recombinantes de plasmodium falciparum en escherichia coli |
publisher |
Instituto Nacional de Salud |
publishDate |
2016 |
url |
https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i3.3011 https://doaj.org/article/f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 |
long_lat |
ENVELOPE(86.736,86.736,72.965,72.965) |
geographic |
Arctic Pura |
geographic_facet |
Arctic Pura |
genre |
Arctic |
genre_facet |
Arctic |
op_source |
Biomédica: revista del Instituto Nacional de Salud, Vol 36, Iss Sup1, Pp 97-108 (2016) |
op_relation |
http://www.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/view/3011 https://doaj.org/toc/0120-4157 0120-4157 doi:10.7705/biomedica.v36i3.3011 https://doaj.org/article/f9781c079cba4c97a3399eb43c0a7764 |
op_doi |
https://doi.org/10.7705/biomedica.v36i3.3011 |
container_title |
Biomédica |
container_volume |
36 |
_version_ |
1766343258673250304 |