Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis of the ITS2 region for differatiation of Brazilian Biomphalaria intermediate hosts of the Schistosoma mansoni Reação em cadeia da polimerase e polimorfismo de tamanho de fragmento de restrição da região do ITS2 para a diferenciação dos moluscos brasileiros do gênero Biomphalaria hospedeiros intermediários do Schistosoma mansoni

• Published in: Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical
• Main Authors: Teofânia Heloísa Dutra Amorim Vidigal, Kelly Grace Magalhães, Omar dos Santos Carvalho
• Format: Article in Journal/Newspaper
• Language: English
• Published: Sociedade Brasileira de Medicina Tropical (SBMT) 2004
• Subjects: Biomphalaria glabrata; Biomphalaria tenagophila; Biomphalaria straminea; Reação em cadeia da polimerase; Região espaçadora transcrita interna 2; Polymerase chain reaction; Internal transcribed spacer 2; Arctic medicine. Tropical medicine; RC955-962; Arctic
• Online Access: https://doi.org/10.1590/S0037-86822004000400012; https://doaj.org/article/efc9796385134a579c3333c76dabfa42

We sequenced the internal transcribed spacer 2 of the ribosomal DNA (ITS2-DNAr) from the three Schistosoma mansoni intermediate hosts in Brazil: Biomphalaria glabrata, Biomphalaria tenagophila and Biomphalaria straminea. Analysis of a restriction map from those sequences allowed us to select putative restriction enzymes able to identify the snail species under study. Four restriction enzymes were used and HpaII provided simple species-specific profiles easily visualized in polyacrylamide gels. The use of ITS2 is advantageous as it provides a small fragment of 460 bp which may be easily amplified by PCR. In the current work, we showed that the amplification of ITS2-DNAr together with HpaII enzyme restriction is an auxiliary molecular tool for the morphological identification of such snails as well as for taxonomic and phylogenetic studies of neotropical planorbids. O sequenciamento da região espaçadora transcrita interna 2 do DNA ribossomal (ITS2-DNAr) das espécies brasileiras gênero Biomphalaria (B. glabrata, B. tenagophila and B. straminea) hospedeiras intermediárias do Schistosoma mansoni no Brasil, permitiu a análise dos sítios de restrição presentes nestas seqüências. A análise do mapa de restrição obtido dessas seqüências nos permitiu selecionar enzimas mais promissoras que gerassem perfis de restrição capazes de identificar essas espécies. Foram testadas 4 enzimas e a enzima HpaII foi selecionada por produzir perfis espécie específicos de fácil visualização em gel de poliacrilamida. A utilização da região ITS2 tem como vantagens a obtenção de um fragmento pequeno de 460bp, o qual pode ser facilmente amplificado por PCR. Neste trabalho, nos demonstramos que a amplificação da região ITS2-DNAr e a restrição deste com a enzima HpaII é uma ferramenta molecular auxiliar a identificação morfológica desses moluscos, bem como para estudos taxonômicos e filogenéticos de planorbídeos neotropicais.