Método fluorescente (diacetato de fluoresceína e brometo de etídeo) para o estudo da viabilidade de Cryptococcus neoformans em líquor Fluorescein method (fluorescein diacetate and ethidium bromide) to study the viability of Cryptococcus neoformans in liquor

• Published in: Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo
• Main Authors: Benedito Corrêa, Adhemar Purchio, Claudete R. Paula, Walderez Gambale, Maria Aparecida Shikanai-Yasuda
• Format: Article in Journal/Newspaper
• Language: English
• Published: Universidade de São Paulo (USP) 1990
• Subjects: Cryptococcus neoformans; Viabilidade; Fluorescência; Arctic medicine. Tropical medicine; RC955-962; Infectious and parasitic diseases; RC109-216; Arctic
• Online Access: https://doi.org/10.1590/S0036-46651990000100008; https://doaj.org/article/7dcd2962175a4453a761205f1bf76765

Padronizou-se método de fluorescência (solução de diacetato de fluoresceína DF e brometo de etídio BE) para análise de viabilidade de células fúngicas, em 40 amostras de liquor, provenientes de casos comprovados de neurocriptococose. A utilização de solução aquosa de saponina a 0,3% eliminou fluorescências interferentes emitidas por hemácias e leucócitos. Após o processamento dos materiais biológicos, foram retiradas alíquotas de 0,1 ml das supensões obtidas e misturadas a volumes iguais da solução DF-BE preparada pouco antes do uso. O tempo de coloração ideal foi de 30 minutos, resultando perfeita diferenciação entre microrganismos viáveis (fluorescência verde) e não viáveis (fluorescência vermelha). The utilization of the fluorescent method (fluorescein diacetate DF and ethidium bromide BE), to verify the viability of fungal cells, was studied in 40 samples of liquor, from patients with neurocryptococcosis. For removing leukocytes and red blood cells, which produce interfering fluorescence, good results were obtained with 0.3% saponin solution. After processing of liquor, 0.1 ml aliquots of resulting suspension were mixed to equal volumes of fresh DF-BE solution. The best incubation period for staining was 30 minutes, resulting in good differentiation between viable (green fluorescence) and non viable (red fluorescence) cells.