Obtención de una sonda específica para evaluar la transcripción del gen STAT5b

• Published in: Biomédica
• Main Authors: Luis Eduardo Díaz, Blanca L. Ortiz, Myriam Sánchez de Gómez
• Format: Article in Journal/Newspaper
• Language: English; Spanish
• Published: Instituto Nacional de Salud 2001
• Subjects: RT-PCR; GH; STAT5b; solution hybridization assay; Medicine; R; Arctic medicine. Tropical medicine; RC955-962; Arctic; Rata
• Online Access: https://doi.org/10.7705/biomedica.v21i2.1102; https://doaj.org/article/6c4f41a9875a4b72b76ea24bacab85b3

Se describe la estrategia empleada para clonar, en un vector de expresión, un fragmento de 306 pb del gen de STAT5b de rata, amplificado por la técnica de RT-PCR. Se amplificó una región en el terminal 3' donde se encuentra la mayor diferencia entre las secuencias del cADN de las isoformas STAT5a y STAT5b de rata. La clonación se logró utilizando el nuevo sistema TOPO-TA recomendado para productos de dificil clonación. El fragmento se subclonó en el vector pBlueScript II SK y se caracterizó mediante secuenciación y análisis de restricción. La subclonación se realizó con el propósito de poder obtener sondas sentido y antisentido de ARN por transcripción in vitro. Esta sonda específica se empleó para cuantificar niveles de mARN de STAT5b en hígado de ratas macho mediante la técnica de hibridización en solución o ensayo de protección de ARNasas.