Molecular Cloning and Functional Expression of a Δ9- Fatty Acid Desaturase from an Antarctic Pseudomonas sp. A3 ... : الاستنساخ الجزيئي والتعبير الوظيفي لـ Δ 9 - نازعة تشبع الأحماض الدهنية من الزائفة القطبية الجنوبية sp. A3 ...

• Main Authors: Lawal Garba, Mohd Shukuri Mohamad Ali, Siti Nurbaya Oslan, Raja Noor Zaliha Raja Abdul Rahman
• Format: Text
• Language: English
• Published: OpenAlex 2016
• Subjects: Lipid Metabolism and Storage in Organisms; Biochemistry; Biochemistry, Genetics and Molecular Biology; Life Sciences; Metabolic Engineering and Synthetic Biology; Molecular Biology; Advances in Metabolomics Research; Fatty Acid Biosynthesis; Palmitoleic acid; Escherichia coli; Biology; Fatty acid desaturase; Fatty acid; Stearoyl-CoA Desaturase; Pseudomonas; Oleic acid; Gene; Open reading frame; Enzyme; Molecular cloning; Cloning programming; Gene expression; Bacteria; Polyunsaturated fatty acid; Peptide sequence; Linoleic acid; Genetics; FOS Biological sciences; Computer science; Programming language; Antarc*; Antarctic
• Online Access: https://dx.doi.org/10.60692/pew3g-13257; https://gresis.osc.int//doi/10.60692/pew3g-13257

Fatty acid desaturase enzymes play an essential role in the synthesis of unsaturated fatty acids. Pseudomonas sp. A3 was found to produce a large amount of palmitoleic and oleic acids after incubation at low temperatures. Using polymerase Chain Reaction (PCR), a novel Δ9- fatty acid desaturase gene was isolated, cloned, and successfully expressed in Escherichia coli. The gene was designated as PA3FAD9 and has an open reading frame of 1,185 bp which codes for 394 amino acids with a predicted molecular weight of 45 kDa. The activity of the gene product was confirmed via GCMS, which showed a functional putative Δ9-fatty acid desaturase capable of increasing the total amount of cellular unsaturated fatty acids of the E. coli cells expressing the gene. The results demonstrate that the cellular palmitoleic acids have increased two-fold upon expression at 15°C using only 0.1 mM IPTG. Therefore, PA3FAD9 from Pseudomonas sp.A3 codes for a Δ9-fatty acid desaturase-like protein which was actively expressed in E. coli. ... : تلعب إنزيمات مزيل تشبع الأحماض الدهنية دورًا أساسيًا في تخليق الأحماض الدهنية غير المشبعة. تم العثور على الزائفة سب. A3 لإنتاج كمية كبيرة من الأحماض النخامية والزيتية بعد الحضانة في درجات حرارة منخفضة. باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، تم عزل جين Δ 9 - جديد من الحمض الدهني منزوع التشبع واستنساخه والتعبير عنه بنجاح في الإشريكية القولونية. تم تعيين الجين على أنه PA3FAD9 وله إطار قراءة مفتوح يبلغ 1185 نقطة أساس والذي يرمز إلى 394 حمضًا أمينيًا بوزن جزيئي متوقع يبلغ 45 كيلو دالتون. تم تأكيد نشاط المنتج الجيني عبر GCMS، والذي أظهر وجود نازعة دهنية وظيفية من الحمض الدهني Δ 9 قادرة على زيادة الكمية الإجمالية للأحماض الدهنية الخلوية غير المشبعة لخلايا الإشريكية القولونية التي تعبر عن الجين. تظهر النتائج أن أحماض البالمتيوليك الخلوية قد زادت شقين عند التعبير عنها عند 15 درجة مئوية باستخدام 0.1 مللي مولار فقط من IPTG. لذلك، فإن PA3FAD9 من Pseudomonas sp.A3 يرمز إلى بروتين Δ 9 - fatty acid desaturase الذي تم التعبير عنه بنشاط في E. coli. ...