Determinación de productos extracelulares de piscirickettsia salmonis

• Main Author: Rojas-Zúñiga, María Estela
• Other Authors: Smith-Schuster, Pedro Alejandro, Universidad de Chile
• Format: Doctoral or Postdoctoral Thesis
• Language: Spanish
• Subjects: Claro; Tuvo; Salmo salar
• Online Access: http://hdl.handle.net/10533/180385

Piscirickettsia salmonis es el agente causal de piscirickettsiosis. Ésta es una enfermedad sistémica que se ha descrito en distintos géneros de peces teleósteos, pero que hasta ahora ha afectado con mayor severidad a salmónidos y en especial a aquellos cultivados en Chile. Con el objeto de contribuir a develar los mecanismos de virulencia de este patógeno, esta tesis se abocó a investigar si esta bacteria genera productos extracelulares (ECPs) y si éstos tienen funciones biológicas de exotoxinas. Para este fin, se emplearon tres aislados de P. salmonis, cuya virulencia fue confirmada y comparada mediante ensayos experimentales en salmones del Atlántico (Salmo salar). La inyección de peces con sobrenadantes de cultivo celular infectados y luegocentrifugados y filtrados para que queden libres de la bacteria (Ps-fs), no reprodujo los signos clínicos de la enfermedad, pero generaron vacuolización intracitoplasmática en el hígado dealgunos peces. Por su parte, la exposición de monocapas de líneas celulares de peces salmonídeos con estos Ps-fs evidenció un claro efecto citotóxico, caracterizado por la formación de células globosas y refringentes, el cual fue notorio en células CHSE-214. Este efecto tuvo una severidad diferente entre los distintos aislados de P. salmonis que se probaron. Hubo una inhibición casi completa de la actividad citotóxica de los ECPs luego de que éstos fueran tratados con proteinasaK, indicando su naturaleza peptídica, y una eliminación total de dicho efecto posterior a ser incubados a 50°C por 30 min. El análisis de los patrones electroforéticos obtenidos en geles dedoble dimensión mostró al menos tres proteínas, con pesos moleculares inferiores a 70 kDa, candidatas a ser estos ECPs. Es posible que estos ECPs sean parte de los mecanismos devirulencia de P. salmonis, pero probablemente deben interactuar acompañados con otros factores para generar el daño patológico completo que se produce durante una infección natural con la bacteria. Los resultados mostraron que P. salmonis produce ECPs y que uno o más de de sus componentes son exotoxinas termolábiles que probablemente juegan un papel en la patogénesis de la piscirickettsiosis.