Essais de propagation in vitro de virus de type herpès infectant les mollusques bivalves marins et contribution à l'étude des interactions hôte-virus

• Main Author: Deniau, Stephane
• Format: Doctoral or Postdoctoral Thesis
• Language: French
• Published: Ecole Pratique des Hautes Etudes 2000
• Subjects: Mollusques bivalves; Crassostrea gigas; Huître japonaise; Infection; Herpèsvirus; Culture cellulaire; Propagation; Mécanisme de défense; Apoptose; Récepteur au TNF; Cytométrie de flux
• Online Access: https://archimer.ifremer.fr/doc/00025/13631/10714.pdf; https://archimer.ifremer.fr/doc/00025/13631/

Des infections à virus de type herpès sont rapportées chez différentes espèces de mollusques bivalves, à travers le monde. Elles sont associées à de fortes mortalités de larves et de juvéniles, pendant les périodes chaudes de l'année. Ce type d'infection virale a été observé sous forme de cellules anormales au moyen de la microscopie photonique et de particules enveloppées à conformation icosaédrique, en microscopie électronique à transmission (MET). Aujourd'hui, il est possible de diagnostiquer la présence du virus grâce à des outils moléculaires tels que la polymérisation en chaîne (PCR) ou l'hybridation in situ (HIS). Cependant, l'absence de lignées cellulaires homologues représente une difficulté majeure. En effet, la recherche d'effet cytopathogène et la propagation in vitro du virus de type herpès n'est pas possible. La première partie des travaux réalisés concerne des essais de propagation du virus de type herpès sur lignées cellulaires hétérologues (mammaliennes) d'une part, et sur cultures primaires homologues d'autre part. Nous avons mis en place différentes expérimentation, prenant en considération des variations des modalités d'infection. Aucune infection significative n'a été observée quel que soit le type cellulaire éprouvé. Les résultats montrent une absence de propagation du virus de type herpès in vitro sur les lignées cellulaires mammaliennes Vero et MRC5, ce qui conforte l'idée pour le virus étudié d'un tropisme d'hôte restreint, propre aux Herpesviridae. La deuxième partie de ce travail concerne l'étude des interactions entre les virus de type herpès et l'huître creuse, Crassostrea gigas. Nous avons choisi d'étudier spécifiquement la mort cellulaire programmée (apoptose) chez les bivalves marins. Il a été montré en effet que les herpèsvirus développent des mécanismes modulant l'apoptose chez leur hôte. De plus, des observations en microscopie électronique à transmission laissent suspecter le phénomène d'apoptose chez les huîtres infectées. Nous avons tout d'abord mis en évidence, à l'aide de différentes techniques (cytométrie de flux, techniques de biologie moléculaire, MET), l'existence de phénomènes de type apoptotiques dans les hémocytes d'huître creuse. A partir du modèle développé au laboratoire, nous avons également mis en place des essais d'induction d'apoptose par le virus de type herpès. Cependant, avec les modalités utilisées, les résultats ne montrent aucun effet significatif. Nos investigations ont également portées sur la mise en évidence de motifs nucléiques impliqués dans l'apoptose dans les génomes d'huître et de virus. Après construction d'amorces consensuelles existant chez les vertébrés pour ce type de gènes, nous avons pu mettre en évidence par PCR des séquences du type Fas et Fas-ligand dans l'ADN d'huître et du type CD40-ligand et Fas-ligand dans l'ADN du virus de type herpès. Le clonage, le séquençage et l'analyse de certains fragments amplifiés ont permis de mettre en évidence dans le génome d'huître creuse, des motifs présentant une homologie importante avec des gènes de vertébrés codant pour le récepteur Fas et son ligand. Les résultats ont également montrés une homologie de séquence importante avec des récepteurs membranaires type tyrosine phosphatase, de même qu'avec le CD40 ligand de Mus musculus, impliqués respectivement dans la croissance cellulaire et dans l'inhibition de la MCP. Les travaux à venir devraient informer de manière plus exhaustive sur l'intégralité des structures et des fonctions qu'elle ont en charge.