Production and characterization of antihypertensive peptides fractionated from Quinoa (Chenonopodium quinoa Willd.) - González - Muñoz; Adrián (2023)
3 3. Selection of enzymes and process optimal parameters to obtain quinoa protein hydrolysates (QPC) in terms of peptides number of residues (lower than 2 kDa) and molecular weight (QPH). TOTAL Para reducir el tamaño molecular de las proteínas a péptidos, se llevó a cabo hidrólisis enzimática. Se utilizó la enzima Alcalasa 2,4 U/g, una endo-peptidasa que mayormente realiza cortes en el enlace peptídico en aminoácidos hidrofóbicos. Se llevó a cabo un diseño experimental tipo superficie de respuesta. Se consideraron dos variables (temperatura (50oC, 55 oC y 60 oC) y razón enzima/sustrato (E/S) (1%, 1,5% y 2%), y se decidió trabajar con un Box Benhhen. La variable de respuesta fue el grado de hidrólisis (GH). Se obtuvieron valores óptimos teóricos: GH: 25,9%, temperatura (X1): 58,6 oC y E/S (X2): 2%, y una ecuación. Las condiciones de operación teórica, fueron evaluadas experimentalmente y adicionalmente al termino de la acción de la endo-peptidasa se evaluó el uso de la enzima Flavourzyme (exo-peptidasa). Se alcanzó un GH del ~20%, y resultados de este proceso se condenaron en el artículo aceptado. 4 4.Fractionation of peptides by hydrophobicity (HQPF) by solid phase extraction (SFE) in order to obtain quinoa peptides fractions differentiated according to hydrophobicity. Determination of peptide production yield. TOTAL Los HPQ fueron fraccionados mediante EFS, en un equipo manifold y en columnas C18 (fase estacionaria) haciendo uso de concentraciones ascendentes de acetonitrilo (ACN) (solvente orgánico) como fase móvil. Se comenzó disolviendo el HPQ en agua (fracción 0N), con lo cual eluyeron aquellos péptidos más afín con el agua (menor hidrofobicidad). Posteriormente, se obtuvieron fracciones mediante mezclas agua/ACN (ascendente), lo cual permitió eluir péptidos cada vez mas hidrofóbicos. Esto fue evaluado y comprobado mediante el uso del reactivo 1-anilino-8-naftalenosulfonato (ANS), el cual es una sonda hidrófoba. Además, se evaluaron los espectros HPLC-RP de las diferentes fracciones (datos no mostrados), ...