Programmed Cell Death-ligand (PD-L1) in Neisseria gonorrhoeae-infected macrophages and anti-PD-L1 as novel therapy for gonorrhea - Escobar - Álvarez; Alejandro (2023)
RESULTADOS OBTENIDOS: Describa los resultados obtenidos de su investigación haciendo referencia a los objetivos originales y/o previamente modificados de su propuesta. La extensión máxima de esta sección es de 5 páginas (letra tamaño 10, Arial o Verdana). El informe no presenta modificaciones académicas. Las figuras mencionadas en la presente sección se encuentran en el archivo anexo: anexo figuras 1188666 Objetivo Específico 1:Evaluar in vitro la expresión de PD-L1 en macrófagos tras la infección con N. gonorrhoeae y sus consecuencias en la activación de las células CD4+. (FINALIZADO) Macrófagos diferenciados a partir de monocitos de sangre periférica fueron infectados por 4 horas con N. gonorrhoeae (Ngo). Las células fueron cosechadas y teñidas con anticuerpo anti-PD-L1 y se determinó su intensidad media de fluorescencia por citometría de flujo. Nuestros resultados muestran que los macrófagos infectados con Ngo expresan significativamente mayores niveles de PD-L1 que macrófagos no infectados y niveles similares que el control positivo de macrófagos con LPS (100ng/mL) (Figura 1). Posteriormente, a partir de Células Mononucleares de Sangre Periférica (PBMC) se obtuvieron linfocitos alogénicos los cuales fueron co-cultivados con los macrófagos en una razón 1:2. Se determinó por citometría de flujo que en los linfocitos cultivados con macrófagos infectados con Ngo existe un mayor porcentaje de células T CD4+ que expresan PD-1, CTLA-4 y CD160 comparados con los linfocitos co- cultivados con macrófagos no infectados, para el marcador TIM-3 no existieron diferencias significativas (Figura 2). Adicionalmente, se analizó la producción de las citoquinas IL-2, IFN-γ y TNF-α usando un ensayo de ELISA. Se observó que los linfocitos TCD4+ cultivados con macrófagos infectados con Ngo producen una menor cantidad de estas citoquinas comparados con los linfocitos co-cultivados con macrófagos tratados con LPS (Figura 3). Además, nuestros resultados muestran que los linfocitos alogénicos co-cultivados con macrófagos infectados ...